【全程复习方略】2015年高中生物选修三课件：1.2基因工程的基本操作程序.pptVIP

【解题关键】明确获取目的基因的方法、基因工程的工具及基因工程操作的基本步骤。 【解析】选A。由题意知：控制蓝色色素合成的基因B是目的基因，提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经反转录获得互补的DNA，再扩增基因B，然后导入天然的玫瑰细胞中，经培育该受体细胞即能获得蓝玫瑰，故选项A正确。限制酶用于切割目的基因而不是获取目的基因；将目的基因B与质粒连接需用DNA连接酶，而不是DNA聚合酶；基因B需与质粒连接形成基因表达载体再导入农杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞，而不能将基因B直接导入大肠杆菌。 2.(2014·聊城高二检测)下列关于基因表达载体的构建描述错误的是(　　) A.基因表达载体的构建是基因工程的核心 B.基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分 C.目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因 D.构建的基因表达载体都是相同的 【解题关键】解答本题需要明确以下两点： (1)基因表达载体的组成； (2)构建基因表达载体的目的、方法。 【解析】选D。基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心；一个基因表达载体的组成，除目的基因外，还必须具有启动子、终止子、标记基因等部分；目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因；由于受体细胞不同，基因表达载体也会有差别，不可能都是相同的。 【变式备选】下列属于获取目的基因的方法的是(　　) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术合成 ⑤利用DNA转录形成 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 【解析】选D。目的基因的获取可以从基因文库中提取，也可以用mRNA反转录形成DNA的一条链，然后合成DNA分子；对于一些已知一段核苷酸序列的目的基因，可用PCR技术扩增合成；对于一些短小而无模板且已知核苷酸序列的目的基因可用人工合成法。受体细胞是目的基因表达的场所，不能从中提取目的基因；DNA转录出的是RNA，不能得到目的基因。 二、目的基因导入受体细胞及检测与鉴定 1.目的基因导入受体细胞的常用方法： Ca2+处理细胞→感受态细胞，表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 目的基因表达载体的提纯→取卵→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞染色体的DNA上→表达 转化过程 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 Ca2+处理法 显微注射法 农杆菌转化法 常用方法 微生物细胞 动物细胞 植物细胞 受体细 胞种类 2.农杆菌转化法分析： (1)完成基因表达载体的构建，需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。 (2)重组的基因表达载体(重组质粒)导入农杆菌的常用方法是用Ca2+处理。 (3)目的基因能够在受体细胞内稳定维持和表达的关键是目的基因插入受体细胞染色体DNA上。 (4)由受体细胞形成植株需要用到植物组织培养技术。 1.2 基因工程的基本操作程序 1.简述基因工程的原理。 2.掌握基因工程基本操作程序的四个步骤。 3.尝试设计某一转基因生物的研制过程。 学习 目标 一、基因工程的四大操作步骤 　　　　　_________的获取 　　　　　　　　↓ 　　　　　_____________的构建 　　　　　　　　↓ 　　　　　将目的基因导入_________ 　　　　　　　　↓ 　　　　　目的基因的_____与鉴定 基因表达载体 受体细胞 检测 目的基因 二、目的基因的获取 1.目的基因： (1)主要是指___________的基因。 (2)一些具有_________的因子。 编码蛋白质 调控作用 2.获取方法： (1)从基因文库中获取。 ①基因组文库：含有一种生物_____的基因。 ②部分基因文库：含有一种生物的_______基因，如cDNA文库。 (2)利用PCR技术扩增目的基因。 ①含义：是一项在生物体外________________的核酸合成技术。 ②原理：____________。 ③条件：_____、DNA模板、______、四种脱氧核苷酸。 所有 一部分 复制特定DNA片段 DNA双链复制 引物 Taq酶 ④过程。 a.目的基因DNA受热_____后解链为单链(90～95℃)。 b._____与单链相应互补序列结合(55～60℃)。 c.在__________作用下进行_____(70～75℃)。 d.重复循环多次。 ⑤结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成_____形式 扩增(约为2n)。 (3)人工合成法。 ①条件：基因比较小，___________已知。 ②方法：通过__________用化学方法直接人工合成。 变性 引物 DNA聚合酶 延伸 指数 核苷酸序列 DNA合成仪 三、基因表