青霉素G酰化酶的研究进展剖析.ppt

青霉素G酰化酶（PGA）的研究进展 背景介绍 青霉素G酰化酶(Penicillin G acylase,PGA,EC3.5.1.11) 能够水解青霉素G(Penicillin G，PG)脱苯乙酰生成6-APA。 青霉素是应用最广的β-内酰胺类抗生素,由于青霉素滥用 导致了抗性病原体产生, 利用新型半合成抗生素是克服这 种抗性病原体产生的有效方法。 大多数新型半合成抗生素由6-APA转化得到，而6-APA主要 由天然氨苄青霉素经酶法或化学方法去酰基得到。酶法合 成具有绝对专一性、避免造成环境污染、产物容易提纯等 优点，是目前生产6-APA的主要方法。 （杨志建等,2004;范超等,2011） PGA的简介 PGA的来源 细菌PGA家族成员分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性 菌。前者有大肠杆菌(Escherichia coli，Ec)、 嗜柠檬酸克吕沃尔 氏菌 (Kluyvera citrophila，Kc)、雷氏普罗威登斯菌 (Providencia rettgeri，Pr)、粪产碱杆菌 (Alcaligenes faecalis，Af)、无色杆菌 木糖氧化属 （Achromobacter xylosoxidans，Ax） 与假单胞菌属 (Pseudomonas sp. ，Ps)等。后者为巨大芽孢杆菌(Bacillus meg- aterium,Bm)与粘节杆菌(Arthrobacter viscosus,Av).(杨志建等,2004) PGA的简介 PGA的结构 青霉素G酰化酶由α，β亚基通过氢键作用结合在一 起，单独的α和β亚基均不具有酶活性，只有两者以适当的形式 结合后才具有活性。PGA的α亚基与青霉素G的侧链结合，决定 酶的底物专一性；β亚基包含催化位点以及与催化有关的残基。 (李宁等,2002) AfPGA的简介 粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis) 是产碱杆菌属 (Alcaligenes) 细菌的模式菌种,该菌在自然界分布很广,是土壤中最常见的 异养微生物之一。目前有些菌株已是应用于发酵生产青霉素 G酰化酶的重要基因工程菌。 (李美等,2009) AfPGA 是粪产碱杆菌来源的青霉素G 酰化酶，AfPGA基因 直到1994年(美国专利5695978)才被克隆，同源性比较结果 表明它处于进化过程的一个独立分支。 AfPGA的特性 AfPGA对底物具有更高亲和力，对青霉素G的Km值比 EcPGA 低，比BmPGA低三个数量级。而其 Kcat 值是所有PGA中最高 的，表现出很高的活性。 (Svedas V 等,1997) AfPGA是PGA家族中唯一在一级结构中具有链内二硫键的成员， 酶的热稳定性和pH稳定性均很高。(Verhaert 等,1997) 在手性分子识别能力上，AfPGA比EcPGA具有更高的选择性。 AfPGA在有机溶剂中表现出很高的稳定性，在双水相，催化抗 生素母核氨基和苯乙酰胺缩合时，其催化效率比EcPGA高出一 个数量级。(vall Langen等, 2000) PGA的应用 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience 在半合成抗生素中间体制备中的应用 青霉素酰化酶可以 催化水解反应制备半合成抗生素中间体6 -APA和7- ACA。 在外消旋混合物的拆分中的应用 青霉素酰化酶对苯乙酰 胺基团有立体选择性, 可用于胺和醇的拆分。拆分得到的 单一对映体可用作合成生物活性化合物的中间体。 在半合成β内酰胺抗生素合成中的应用 具体是利用青霉 素酰化酶催化酰基侧链和β内酰胺核发生缩合反应生产半 合成青霉素和头孢菌素。 在肽合成中的应用 利用青霉素酰化酶可以催化直接的酶 合成反应和酰基转移反应来合成肽及其衍生物。 (崔鹏等,2005;杨志 建等,2004;李震等,2008) PGA目前的研究内容 其他性质的 应用研究 生产菌种的 选育和改造 发酵生 产工艺 酶法生产 6- APA的 下