NY_T538-2015鸡传染性鼻炎诊断技术.docVIP

ics 11.220B41 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 538—2015 代替 NY/T 538—2002 鸡传染性鼻炎诊断技术 Diagnostic techniques for infectious coryza of chickens 2015-10-09 发布 2015-12-01 实施 中华人民共和国农业部发布 刖 本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草。 本标准提供了几种诊断鸡传染性鼻炎的方法以及抗体检测方法，应根据使用单位的具体情况选择 使用。 本标准代替NY/T 538—2002《鸡传染性鼻炎诊断技术》。与NY/T 538—2002相比，除编辑性修 改外主要技术变化如下： ——删除了琼脂双向双扩散试验和阻断酶联免疫吸附试验(B-ELISA)两种方法(见2002年版的6 和8); ——增加了临床诊断(见2); ——增加了血凝抑制试验(鉴定副鸡禽杆菌的血清型）（见5); ——增加了 B型副鸡禽杆菌的血凝抑制抗体的检测(见7. 2. 1)。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位:北京市农林科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人:孙惠玲、陈小玲、张培君、苗得园。 本标准的历次版本发布情况为： NY/T 538—2002 0 引 鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌(Awzrterfww faraga沾，A 引起的一■种鸡 急性上呼吸道传染病。本病在世界许多地方都有发生和流行，引起蛋鸡产蛋量下降，育成鸡生长发育受 阻和淘汰率增加，肉鸡肉质下降，造成很大的经济损失。 Page分型方法将副鸡禽杆菌分为A、B、C 3种血清型，我国从1980年起就有许多疑似本病的病例 出现。到目前为止，3种血清型引起的发病都有报道，它们具有共同抗原和各自的型特异性抗原，可以 通过检测型特异性抗原来鉴定副鸡禽杆菌的血清型。另外，鸡传染性鼻炎商品化灭活疫苗的免疫接种 十分广泛，应用血清学试验可以检出各型特异性抗体，用来评价疫苗的免疫效果。 近1〇年来，我国的鸡传染性鼻炎疫情又有了新的变化，主要表现在两个方面:一是目前我国鸡传染 性鼻炎的流行特点发生了变化，除了前些年报道的A型、C型副鸡禽杆菌之外，出现了 B型副鸡禽杆菌 的流行。二是原有标准在抗体的检测上提供了几种方法，但是在鉴定抗原方面提供的方法很局限，基本 上没有提供能够鉴定血清型的诊断方法。为了适应我国标准化工作发展的需要，为鸡传染性鼻炎的诊 断和防控提供技术依据和保障，有必要对NY/T 538—2002进行修订。 E 鸡传染性鼻炎诊断技术 1范围 本标准规定了引起鸡传染性鼻炎的副鸡禽杆菌的诊断技术要求。 本标准中规定的临床诊断、细菌分离鉴定、聚合酶链式反应(PCR)技术适用于鸡传染性鼻炎的诊断，血 凝抑制试验(鉴定副鸡禽杆菌的血清型)适用于鉴定菌株的血清型。血清平板凝集试验、血凝抑制试验(检 测副鸡禽杆菌抗体)、间接酶联免疫吸附(ELISA)试验适用于流行病学调查和免疫鸡群抗体的检测。 2临床诊断 鸡传染性鼻炎的一个特征是潜伏期短、发病迅速。最明显的症状是鼻腔有黏液性分泌物流出、面部 水肿、结膜炎以及泪液分泌增多。公鸡有时可见肉垂肿胀。病鸡可出现腹泻、采食和饮水下降，蛋鸡产 蛋下降。发病率高但死亡率低，死亡率可因其他病原继发感染或者混合感染而升高。 如果症状全部符合或者有部分符合，则可判为可疑，再进行如下的细菌分离鉴定。 3细菌的分离鉴定 3.1材料准备 1. 1无菌棉拭子、鲜血琼脂平板培养基、无菌鸡血清或牛血清、TSA(胰蛋白胨大豆琼脂，Tryptic Soya Agar)和 TSB(胰蛋白 胨大豆肉汤，Tryptic Soya Broth)培养基。 1. 2产烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD，或还原型NAD)表皮葡萄球菌。 3.2操作程序 3.2.1无菌打开可疑鸡的眶下窦，用灭菌棉拭子蘸取其中黏液或浆液。 3.2.2用棉拭子在鲜血琼脂平板培养基上横向划线5条?7条，然后用接种环取表皮葡萄球菌从横线 中间划一纵线。 2. 3将划好的平皿置于5%的(302培养箱中（37±1)°C培养24 h?40 h。 3.2.4观察菌落特点。 3.2.5取菌落做过氧化氢酶试验，必要时通过进一步的生化反应做详细的特征鉴定。副鸡禽杆菌的生 化反应特点、培养特性及过氧化氢酶试验方法见附录A。 3.2.6应用PCR方法鉴定可疑菌落，经PCR鉴定正确后，取可疑菌落纯培养物作为攻毒样品进行动 物试验，方法见附录B。 3.3结果判定与表示方法 若鲜血琼脂培养基上出现“卫星样”生长的露珠状、针尖大小的小菌落，即靠近产NAD表皮葡萄球菌 处菌落较大，直径可达0. 3 _，离产NAD表皮葡萄球菌菌落越远，菌落越小，过氧化