河北省张家口市宣化区第四中学2015-2016学年高中生物 3.2月季的花药培养课件 新人教版选修1.pptVIP

* 专题三 课题2《月季的花药培养》 单倍体育种 过程：花药离体培养→单倍体幼苗→二倍体植物体 人工诱导染色体加倍 秋水仙素处理 单倍体育种意义 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等阶段。 （一）被子植物的花粉发育 雄蕊 基础知识 （一）被子植物的花粉发育 被子植物花粉的发育过程 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 主要取决于： （二）产生花粉植株的两种途径 体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。 （三）影响花药培养的因素 材料的选择 培养基的组成 月季花药培养基配方 i 在1000mL MS培养基配方中添加2,4-D 0.4mgKT 0.2mgIAA 4mg调节pH至5.8 （三）影响花药培养的因素 ——材料的选择 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。 （三）影响花药培养的因素 ——材料的选择 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 （三）影响花药培养的因素 （一）材料的选择 　　选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 　　最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 实验操作 （二）材料的消毒 1. 将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s 2. 无菌水清洗 3. 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4. 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中 2~4min（也可质量分数为1%的次氯酸钙 溶液或饱和漂白粉溶液） 5. 无菌水冲洗3~5次 （三 ）接种和培养 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 （三 ）接种和培养 通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。（主要原因是营养核和生殖核融合造成的。）故需对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。 （三 ）接种和培养 植物组织培养技术与花药培养技术的比较 项目 相同点 不同点 植物组织培养技术 离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。 外植体为体细胞，染色体数无需加倍。 花药培养技术 取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。 选材是否恰当 　　选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 课题成果评价 无菌技术是否过关 　　如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。 课题成果评价 *