神经学研究必备头部定位.docVIP

小立体定位技术 一、实验目的 1. 了脑立体定位技术。 2. 掌握脑立体定位图谱使用方法。 二、实验原理 立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中，成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要使用脑立体定位仪作为定位仪器，利用某些颅骨外面的标志（如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等）或其它参考点所规定的三度坐标系统来确定皮层下某些神经结构的位置以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究，是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究常用的实验动物，如大鼠、小鼠、猫等高等哺乳动物以及鸟类均有完全的外耳道，可用（耳棒）来定位。在确定了颅外标记之后，就可按脑立体定位图谱所提供的数据进行定位操作。 三、实验器材 江湾-Ⅰ型脑立体定位仪，MC-5微操作仪，常规手术器械，钻孔针，纱布，干棉球，酒精，0.4%戊巴比妥钠（麻醉剂，现配现用），生理盐水，1ml注射器，3%双氧水， 小白鼠。 四、实验步骤 1. 江湾Ⅰ型脑定位仪的使用 1.1 校验仪器 定位仪经过搬动或长期不用后，使用前需先加以校验。重点是检验电极移动架各滑尺是否保持直角，可用三角板测定各滑尺所成的角度是否是直角；各衔接部与螺丝有没有松动；滑尺是否太松；检查主框两臂的平行情况；最后观察固定头的装置两侧对称程度，小框是否与主框平行。检查仪器无故障后，可进行下列校验性操作： （1）将两侧耳杆柱旋松，在主框上前后滑动，然后再按照原规定刻度装好，看两侧耳杆尖是否完全对正。 （2）取下一侧耳杆，将一侧电极移动架装好，前后左右上下移动各滑尺，使装在电极夹上的金属定位针尖正对耳杆尖的中心，记下各滑尺的刻度读数，再卸下移动架再装上，并按上法测定耳杆尖的部位，记下三个滑尺的读数，反复操作取平均数首先将放置水平的脑立体定位仪上的两个滑道，按实验的要求调节好合适的高度后。 （3）然后再用水平尺调正好两个滑道的前后、左右水平。这时再把安置在滑道上的手动微推进器按上面的刻度调节垂直。 1.2 确定脑立体定位零点，小鼠脑定位的系统大致分两种： （1） 用耳间线中心定位，首先将两个耳棒尖端在定位仪滑道中间部位彼此相接触（两个耳棒读数相同），旋紧镙丝。然后取下一侧耳棒，另一耳棒不动。调节移动推进器，使校验电极尖端与耳棒尖端的中心点相触，即为A点（即耳间线中心点），并记下刻度值。然后，将推进器水平移动到门齿钩的上方，将门齿钩平面与校验电极尖端相触。这时就定出外耳道中心点与门齿牙板上面上沿之间的水平切面0点，记为H0。这时，动物的前囟和后囟基本处在一个水平面上，相差0-0.1mm。另外，规定耳间线中心点以上为+，向下为-；向嘴侧为+，向尾侧为-。 （2）用颅骨标志定位（常用前囟），即以前囟为嘴尾侧0点，由前囟向嘴侧为+，向尾侧为-，其它与上面定位方法相同（图示）。 2. 实验内容 （1）麻醉：小鼠，体重20-30g，称重后以0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉注射时必须缓慢，随时注意动物状态。 （2）小鼠头部固定：将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器，然后把一侧的耳捧推入动物的外道后，使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。这时观察两个耳棒的刻度一致后，将两耳棒上的固定螺丝扭紧，在将牙齿固定器上压鼻环压下后扭紧（鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好），这时从各个方向推压动物头部均不会出现移动。 （3）开颅钻孔前的备皮：剪去动物头部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口，分离皮下组织，用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离，推开骨膜，暴露前囟、人字缝及矢状缝。 （4）确定标准中线：将金属定位针向下移动到矢状缝上方后，再前后移动定位针，使定位针定位到前囟。 （5）小鼠海马定位：用定位针在前囟后2mm, 矢状缝旁开2.5mm处定位一点，即为海马的平面位置，然后在此点上用钻孔针在颅骨上钻一小圆孔。 （6）注射药物：小鼠海马则位于该圆孔下2 mm，将1ml注射器吸入药物安置到MC-5微操作仪上，操作仪器使注射器针头由小鼠脑钻孔处下降2mm时完成药物注射到小鼠脑海马处。 （7）制作脑组织切片：将小鼠脑制作成切片，显微观察小鼠脑中红染料位置来验证小鼠脑海马中是否定位准确。 1