第八章微生物遗传和变异解说.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2. 国外重要菌种保藏机构 变量实验，影印实验，转化，转导，接合 基因突变的特点 试比较普遍转导和局限转导的异同 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第三节 基因重组 一、原核生物的基因重组 （一）转化 供体菌 受体菌 DNA片段 1928年，Griffith发现肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的转化现象,目前已知有二十多个种的细菌具有自然转化的能力 进行自然转化，需要二方面必要的条件： 1、建立了感受态的受体细胞 感受态细胞：具有摄取外源DNA能力的细胞 自然感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性，受细菌自身的基因控制； 人工感受态则是通过人为诱导的方法，使细胞具有摄取DNA的能力，或人为地将DNA导入细胞内 2、外源游离DNA分子（转化因子） 转化过程（革兰氏阳性菌的转化模型） 噬菌体DNA被感受态细胞摄取并产生有活性的病毒颗粒 转染(transfection)： 转染的特点：提纯的噬菌体DNA以转化的（而非感染）途径进入细胞并表达后产生完整的病毒颗粒。 转化过程的特点： a）对核酸酶敏感； b）不需要活的DNA供体细胞； c）转化是否成功及转化效率的高低主要取决于转化供体菌株和转化受体菌株之间的亲源关系； d）通常情况下质粒的自然转化效率要低得多 （二）细菌的转导（transduction） 由噬菌体介导的细菌细胞间进行遗传交换的一种方式 一个细胞的DNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中 细菌转导的类型： 普遍转导 局限转导 普遍转导（generalized transduction） 噬菌体可以转导供体菌染色体的任何部分到受体细胞中的转导过程. 普遍性转导的三种后果： 外源DNA被降解，转导失败。 进入受体的外源DNA通过与细胞染色体的重组交换 而形成稳定的转导子 流产转导 局限转导 温和噬菌体感染 整合到细菌染色体的特定位点上宿主细胞发生溶源化 溶源菌因诱导而发生裂解时，在前噬菌体两侧的少数宿主基因因偶尔发生的不正常切割而连在噬菌体DNA上 部分缺陷的温和噬菌体 把供体菌的少数特定基因转移到受体菌中 局限转导与普遍转导的主要区别： （a）局限转导中被转导的基因共价地与噬菌体DNA连接，与噬菌体DNA一起进行复制、包装以及被导入受体细胞中。而普遍性转导包装的可能全部是宿主菌的基因。 （b）局限性转导颗粒携带特定的染色体片段并将固定的个别基因导入受体，故称为局限性转导。而普遍性转导携带的宿主基因具有随机性。 （三）接合(conjugation) 通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传信息的转移和重组过程。 接合机制(大肠杆菌的接合机制) 接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导。 F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛及控制接合过程进行的20多个基因。 F因子为附加体质粒 既可以脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合）到染色体上 F因子的四种细胞形式 a）F-菌株(“雌性”菌株)，不含F因子，没有性菌毛，但可以通过接合作用接收F因子而变成F+菌株； b）F+菌株(“雄性”菌株)， F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 c）Hfr菌株，F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 d）F′菌株，Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因 子。 细胞表面同样有性菌毛。 1） F+×F-杂交 理化因子的处理可将F因子消除而使F+菌株变成F-菌株 2）Hfr ×F-杂交 Hfr菌株仍然保持着F+细胞的特征，具有F性菌毛，并象F+一样与F-细胞进行接合。 所不同的是，当OriT序列被缺刻螺旋酶识别而产生缺口后，F因子的先导区(leading region)结合着染色体DNA向受体细胞转移。 F因子除先导区以外，其余绝大部分是处于转移染色体的末端，由于转移过程常被中断，因此F因子不易转入受体细胞中。 Hfr×F-杂交后的受体细胞(或接合子)大多数仍然是F-。 染色体上越靠近F因子的先导区的基因，进入的机会就越多，在F-中出现重组子的的时间就越早，频率也高。 3）F′×F-杂交 Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时，形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因子。 F′×F-与F+×F-的不