WesternBlot解说.ppt

Western blot 印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。 而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法 在电场的作用下，将电泳分离的蛋白质混合物从凝胶转移至固相支持膜上，再利用某种蛋白（目的蛋白，如GAPDH）的特异性抗体来对其进行鉴定，可进行定量分析。 蛋白样品的制备 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理：SDS是一种离子性的界面活性剂,它有强离子性的硫酸根离子也带有疏水性的长碳链.当 SDS 与蛋白质混合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺基酸结合将蛋白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用，由于 SDS 带强负价,使蛋白质原先的带电价微不足道, 所以决定不同蛋白的泳动速率就只剩下分子大小一项因素。 ECL发光 1、倒掉洗膜液，将PVDF膜夹于吸水纸中间，吸去多余液体，转膜时与胶相邻的一面向上，铺于玻璃板上； 2、将ECL试剂盒内的detection reagent 1与de