猪囊尾蚴AgB基因氨基端和羧基端片段和猪CD58基因共表达DNA疫苗构建及其免疫活性初步分析.doc

新疆农业大学硕士学位论文　 致　　　　谢　  本研究属于国家重大基础研究规划项目  ９７３  项目  编号 Ｇ１９９９０１１９０６  中的部分  内容  在兰州兽医研究所寄生虫研究室完成  在此对课题资助者和所有关心和帮助我的老  师表示诚挚的感谢  　  本论文是在导师才学鹏研究员 岳城教授的悉心指导下  经过不懈的努力才圆满完成  的 三年来两位导师在学习 工作和生活等方面都给予了我无微不至的关怀和热情的帮助  在论文的选题  实验技术的指导及论文的审阅方面均倾注了大量的心血  两位导师严谨的  治学态度  一丝不苟的敬业精神和平易近人的学者风范都给我留下深刻印象  也将激励我  在今后的科学道路上  在人生的旅途中不畏险阻  积极乐观  勇往直前  在此论文完稿之  际  特向我的两位恩师致以崇高的敬意和衷心的感谢  　  衷心感谢课题组的景志忠博士 郑亚东师兄 骆学农师兄 窦永喜师兄 蒙学莲师姐  王佩雅老师  贾万忠博士  李辉师兄  袁改玲师姐  吴国华  海岗  郭爱疆  余招锋 田  广孚研究员  靳家声研究员  闫鸿斌师弟等二年来在工作和生活上给予的关怀和帮助 病  毒研究室主任刘湘涛老师  郭慧琛博士  寄生虫研究室主任罗建勋老师为我在实验中创造  了条件并提供了便利  在此也向他们和全室的其他老师和同学们一并表示衷心的感谢 　  衷心感谢新疆农业大学动物医学院的简子健院长  冉多良副教授  余佳琳老师 杨红  军师母  单文鲁教授  新疆农业大学研究生处王莲芳老师及其他各位老师给予我热情的支  持和帮助  　  最后  真诚感谢我的朋友刘志杰 周红玲  孟海燕  王远志  韩宗玺及我的父母 妹  妹多年来对我的关心 　 　 　 　 　 　 　 　 　  支持和鼓励  　 新疆农业大学硕士学位论文　 摘　　　　要　 国内外研究证明 用猪囊尾蚴 ＡｇＢ 重组疫苗或 ＤＮＡ 疫苗免疫小鼠或猪能有效地抵御猪 带绦虫虫卵的攻击感染 本实验选取了猪囊尾蚴 ＡｇＢ 氨基端 ＡｇＢ－Ｎ　８０８ｂｐ 和羧基端 ＡｇＢ－Ｃ　 ９４３ｂｐ 作为免疫原基因 并以共刺激分子猪 ＣＤ５８ 基因为佐剂基因来构建真核表达载体 ＰＢＮ 和 ＰＢＣ 分别研究它们免疫 ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠后所产生的免疫应答 从而为进一步研制猪囊尾蚴  ＤＮＡ　疫苗打下基础  本实验从 ＣｏｎＡ 活化的猪外周血单个核细胞 ＰＢＭＣ  提取总 ＲＮＡ  用  ＲＴ  ＰＣＲ 方法扩增出 ８００ｂｐ　的片段  将扩增产物连接到克隆载体中  经酶切鉴定 ＰＣＲ 分  析以及确证性测序后证明  所克隆 ８００ｂｐ 的片段含 ＣＤ５８ 基因完整的开放阅读框 其核苷  酸序列和氨基酸序列与国外发表的猪 ＣＤ５８ 基因的同源性分别为 ９９．４％和 ９９．２％ 先将 ＣＤ５８  插入双启动子真核表达载体 ｐＢｕｄＣＥ４．１ 的 ＥＦ－１á 启动子下游 构建表达载体 ＰＣＤ  再分别  将 ＡｇＢ－Ｎ 和 ＡｇＢ－Ｃ 插入 ＰＣＤ 的 ＣＭＶ 启动子下游  制备 ＤＮＡ 疫苗　ＰＢＮ 和 ＰＢＣ  分别免疫 ４ 周  龄雌 ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠 ２ 周后加强免疫一次 每周用 ＥＬＩＳＡ 检测小鼠血清中的抗体水平 隔周 用 ＭＴＴ 法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖反应 结果表明 ＤＮＡ 疫苗 ＰＢＮ 和 ＰＢＣ 均可引发机体产  生体液免疫和细胞免疫 且 ＰＢＮ 引发的细胞免疫强于体液免疫  ＰＢＣ 引发的体液免疫强于  细胞免疫 但 ＤＮＡ 疫苗产生的体液免疫弱于猪囊虫纯化抗原引发的体液免疫  强于猪囊虫  纯化抗原引发的细胞免疫 　 　 　 　  　  关键字  猪囊尾蚴  ＡｇＢ 氨基端基因  ＡｇＢ 羧基端基因  猪 ＣＤ５８ 基因  ＤＮＡ 疫苗　  　 　 　 　 　 1 新疆农业大学硕士学位论文　 Abstract Inoculation of cysticercus cellulosae AgB recombinant or DNA vaccine can efficiently prevent mouse or pig from infecting of Taenia solium has been proved as many researches in both China and abroad. In this study, total RNA was extracted from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulate