分子生物学DNA的生物合成(复制).pptVIP

第 十 章 DNA的生物合成(复制) DNA Biosynthesis，Replication 一、半保留复制的实验依据和意义 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。 子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 （二） 半保留复制的理论设想 （三） 子链继承母链遗传信息的几种可能方式 （四）半保留复制的证明——实验 实验结果说明 子一代DNA双链中 一股是15N单链，从亲代接受和保留下来的； 另一股是14N单链，完全是新合成的。 Messelson和Stahl的实验支持半保留复制。 二、双向复制 原核生物DNA 复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物 真核生物有多个染色体均需要复制，每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。 复制子是独立完成复制的功能单位。 高等生物有数以万计的复制子，长度差异很大。 真核生物的多复制子复制 三、复制的半不连续性 第二节 DNA复制的酶学 The Enzymology of DNA Replication 参与DNA复制的物质 一、复制的化学反应 二、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 活性（作用）有两方面： 5??3? 的聚合活性， 延5??3?方向延长脱氧核苷酸链。 核酸外切酶活性（两种情况） 3? ? 5?外切酶活性，能辨认错配的碱基对，并将其水解。 5? ? 3?外切酶活性，能切除突变的 DNA片段。 核酸外切酶活性 （一）原核生物的DNA聚合酶 DNA-pol Ⅰ DNA-pol Ⅱ DNA-pol Ⅲ （二）真核生物的DNA聚合酶 三、复制保真性的酶学依据 四、复制中的分子解链及DNA 分子拓扑学变化 DNA分子的碱基埋在双螺旋内部，只有把DNA解成单链，它才能起模板作用。 （二）DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase) 五、DNA连接酶 第三节DNA生物合成过程The Process of DNA Replication 解链过程 DnaA、B、C三种蛋白参与 2. 引发体和引物 引物的合成 （二）复制的延长 复制的延长指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐个加入引物或延长中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不断生成。 复制的过程 冈崎片断的连接 二、真核生物的DNA生物合成 细胞周期（Cell cycle） 指细胞分裂的时相变化。 典型的细胞周期分为4期： G1期（DNA合成前期） S期（细胞分裂的合成期），合成DNA G2期（ G2期主要合成一些与有丝分裂中新细胞形成所必需的物质） M期（细胞染色体形成并发生细胞分裂，新细胞在此期形成） 体内活细胞周期长短相差悬殊，关键在G1进入S期。营养良好的培养细胞周期约24小时。 真核生物DNA复制特点 不同染色体各自进行复制 每个染色体有上千个复制子，复制起点多 复制有时序性 复制子以分组方式激活而不是同步启动 转录活性高的DNA在S期早期就开始复制 卫星DNA（高度重复序列）、中心体（连接染色体双倍体的部位）、端粒（线性染色体两端）在S期最后复制 复制起始点比大肠杆菌起始点OriC短 复制起始需要DNA-Pol α（引物酶）、δ（解螺旋酶）、拓扑酶、复制因子（ replication factor, RF）、增殖细胞核抗原（ proliferation cell nuclear antigen, PCNA）参与。 （一）真核生物复制的起始 复制起始也是打开复制叉形成引发体并合成RNA引物，但详细机制不清楚。 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 相关的蛋白激酶 具有四级结构的蛋白质，有两类亚基： 调节亚基——细胞周期蛋白（cyclin） 催化亚基——细胞周期蛋白依赖激酶（cyclin dependent kinase，CDK） 二者都有多种，而且可以交叉配伍，实现对DNA复制的多样化和精确的调节。 哺乳类动物细胞内还发现天然抑制CDK的蛋白： 锚蛋白（ankynin）——抑制CDK4 P21蛋白——抑制多种CDK，还抑制PCNA，还参加P53介导的细胞凋亡级联反应。 P21 和锚蛋白被称为细胞检查点蛋白。 线性DNA复制的末端 端粒(telome