DNA高级结构、理化性质及应用2.pptVIP

在DNA解链过程中，由于更多的共轭双键得以暴露，DNA在紫外区260nm处的吸光值增加，并与解链程度有一定的比例关系，这种关系称为DNA的增色效应。 * * 一、DNA的双螺旋结构及其意义 1953年，Watson和Crick发现了DNA双螺旋（double helix 结构模型。 DNA双螺旋结构要点： Watson和Crick，1953 DNA 由两条反相平行的脱氧核苷酸链组成，脱氧核糖-磷酸骨架位于双链的外侧，碱基位于内侧，双链的碱基之间以氢键相结合。 （碱基互补配对形式：A?T； G?C 2. DNA是右手螺旋结构，螺旋直径为2nm，螺距为3.4nm。碱基平面垂直螺旋轴，相邻碱基平面距离为0.34nm，螺旋一圈包含10对碱基。 3. 氢键维持DNA双链横向稳定性，碱基堆积力维持双链纵向稳定性。 图1-8 DNA双螺旋结构示意图 上述Watson和Crick的DNA双螺旋结构称为B型结构，是DNA分子在生理条件下最稳定的结构，如果改变溶液的离子强度或相对湿度，DNA螺旋结构的上述特征就会发生变化。 右手螺旋， 11 碱基/螺旋 右手螺旋， 10 碱基/螺旋 左手螺旋， 12 碱基/螺旋 可能参与基因的表达和调控 DNA双螺旋结构不同构型的意义并不在于其螺旋直径及其高度的变化，关键是由于这些变化而引起的表面结构的改变，进而影响其生物学功能。 DNA双螺旋的这种表面结构有助于DNA结合蛋白识别并结合特定的DNA序列。而这种表面构型的变化对基因组DNA与其DNA 结合蛋白的特异性相互作用具有重要的意义。 二、其它类型的DNA高级结构 1、三股螺旋DNA 三股螺旋DNA也称三链DNA（triple strand DNA, tsDNA , 其结构是在DNA双螺旋结构的基础上形成。 双螺旋通过Watson-Crick氢键稳定，而三股螺旋沿需通过Hoogsteen氢键稳定。 三条链均为同型嘌呤（homopurine,Hpu 或同型嘧淀（homopyrimidine,Hpy ,即整段的碱基均为嘌呤或嘧啶。 根据三链的组成和相对位置分为两种基本类型： 嘌呤-嘌呤-嘧啶型（Pu-Pu-Py型 ： 嘧啶-嘌呤-嘧啶型（Py-Pu-Py型 ： ——在碱性介质中稳定 ——在偏酸性介质中稳定 三链中的两条链为正常双螺旋，第三条嘧啶链位于双螺旋的大沟中，并随双螺旋结构一起旋转。 三链中碱基配对符合Hoogsteen模型： 在Py-Pu-Py型中为：T A T、C+ G C（与G形成Hoogsteen键的C必须质子化）； 在Pu-Pu-Py中为：G G C、A A T 当DNA双链中含有H-回文序列时，即某区段DNA两条链分别为Hpu和Hpy，并且各自为回文结构时，任一条回文结构的5’ 和3’部分都可以形成分子内三股螺旋及剩余的半条回文游离单链。 在一定条件下，含回文序列DNA还可形成小瘤DNA（nodule DNA , 它在中性溶液中稳定。 真核生物基因组中存在大量可形成三链DNA的多聚嘌呤核苷酸和多聚嘧啶核苷酸序列。这些序列有的存在于调控区，有的位于DNA复制的起点或终点，有的则位于染色体重组位点，提示它们可能与基因的表达调控、DNA的复制及染色体的重组有关。 2、十字型结构 十字型结构的分子基础是DNA分子中存在翻转重复序列。 此时不仅两条链互补。单链中的翻转重复区也可以互相配对形成双链分子。 DNA变性后或因其他原因引起DNA分子两条链分开，再复性时翻转重复区的DNA可以自我配对，形成突出于双链之外的发夹结构，两个并列的发夹形成十字结构。 5’ TCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGC AGGCCGTTTGTTTGTGGGCGACCATCGCCACCAAAAAAACAAACG 5’ G G T TA CG GC CG CG AT CG CG AT AT AT TA TA TA GC GC TA GC GC CG GC AT C A C 5’ - - -TCCGGCAAAC TTTTGTTTGC- - - - - -AGGCCGTTTG AAAACAAACG- - -5’ 与DNA双螺旋结构相比,十字形结构中氢键形成减少,而且失去了双螺旋DNA碱基堆积力的相互作用,因而稳定性不如双螺旋DNA. 十字形结构可能在基因表达调控中起作用, 但其确切的生物学功能有待研究. 3. DNA的超螺旋结构 DNA双螺旋进一步盘曲形成更加复杂的结构称为DNA的三级结构,即超螺旋结构. 正超螺旋:DNA的盘曲方向与DNA双螺旋方向相同. 负超螺旋:DNA的盘曲方向与DNA双螺旋方向相反. 1 2 核小体 核