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研究目的及意义 本项目通过对小鼠炎性疼痛模型的行为学检测和对小鼠脊髓3～5节段ERK的测定，探讨苎叶蒟碱B及川穹嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)的镇痛效果及其分子机制，为苎叶蒟和川穹嗪作为新的镇痛药剂的临床应用提供理论依据。 项目研究内容与方案 项目特色与创新之处 充分利用我国民族药物资源丰富的优势，在民族药物中寻找效果较好的镇痛有效成分。 为苎叶蒟及川穹嗪作为新的镇痛药剂的临床应用提供理论依据。 成功制作小鼠炎性疼痛模型并对模型进行行为学检测，结合动物行为学观察数据及免疫组织化学进行分子检测结果对实验结果进行综合、可靠、科学的分析。 通过科学的实验方法获得了川穹嗪对PF致炎性疼痛镇痛效果的作用，为川穹嗪镇痛作用机制的进一步研究奠定了理论基础。 项目实施情况 项目所取得的成果 主要结论 附图1 附图2附图1 成年健康小鼠左足脚掌皮下注射20μL 4%福尔马林后立即出现由化学物质直接刺激神经元所致的疼痛第一时相，出现舔咬注射脚掌疼痛反应，大概持续3~9min。附图2 成年健康小鼠左足脚掌皮下注射20μL 4%福尔马林15~20min后由于周围炎性导致组织胺、羟色胺、缓激肽和前列腺素等炎性介质的释放而产生疼痛第二时相，出现缩腿疼痛反应。 舔咬足时间 脊髓背角ERK表达结果 有待进一步讨论和研究的课题 经费使用情况 致谢 Company Logo 指导老师: 负 责 人: 小组成员: 日期：2015年5月18日 苎叶蒟碱B对小鼠炎性疼痛模型的镇痛效果及机制的研究 项目编号：湘教通[2015]666-888 大学生创新性实验计划项目结题答辩 一、项目研究意义 七、致谢 六、经费使用情况 五、项目取得的成果 四、项目执行情况 二、项目研究内容与方案 三、项目特色与创新之处 炎性疼痛模型 (福尔马林致痛法) 阳性对照 吗啡 2.5mg/kg 阴性对照组 小鼠灌胃等量生理盐水 给药组（川穹嗪 ） 按小鼠体重 0.05ml/10g灌胃30d 行为学检测 （添足和咬足时间） ERK 免疫组化 Western Blot 结果分析 用免疫组化及western blot分别检测ERK表达变化。 2015年9月-2015年9月 统计分析数据结果，撰写论文 2015年9月-2015年9月 用免疫组化及western blot分别检测ERK表达变化。 2015年9月-2015年9月 制作小鼠炎性疼痛模型，并用川穹嗪进行预处理。对模型进行行为学检测，观察舔足及咬足时间。 2015年9月-2015年9月 通过查询相关文献资料对实验方案进行紧急调整。 2015年9月-2015年9月 制作小鼠炎性疼痛模型，并用不同剂量苎叶蒟碱B处理。对模型进行行为学检测，观察舔足及咬足时间。 2015年9月-2015年9月 制作小鼠炎性疼痛模型，对模型进行行为学检测，观察舔足及咬足时间。 2015年9月-2015年9月 经过大量反复实验，以及对实验数据的分析后，分别于2013年12月、2015年在核心期刊发表文章两篇： 论文名称： 刊物名称： 发表时间： 论文名称： 刊物名称： 发表时间： 结果 ： 在疼痛第一时相（注射PF后10min内），NS预处理组与TMP预处理组两者之间行为学检测没有统计学差异；在疼痛第二时相（注射PF后10~45min），小鼠NS预处理组注射PF后，舔足咬足持续时间可达285s，TMP预处理组注射PF后，舔足咬足持续时间可达145s，两者相比有统计学差异（P=0.0072）。实验小鼠脊髓背角ERK免疫组化荧光检测，TMP预处理组与生理盐水预处理组相应时间点相比，TMP预处理组PF给药30min、60min亚组小鼠脊髓背角ERK阳性表达均弱于前者，有统计学意义（P0.05）。 结论： TMP能调节小鼠背角ERK表达从而调节PF致炎性痛的程度。 小鼠炎性疼痛模型 昆明小鼠足底注射4%甲醛后，舔足咬足等疼痛行为表现为两个时相，第一时相为注射PF后10min内，第二时相开始于10min之后，可持续45min。第一时相内，本实验小鼠NS预处理组注射PF后，舔足咬足持续时间可达125s，TMP预处理组注射PF后，舔足咬足持续时间可达133s，两者之间没有统计学差异；第二时相内，本实验小鼠NS预处理组注射PF后，舔足咬足持续时间可达285s，TMP预处理组注射PF后，舔足咬足持续时间可达145s，两者相比有统计学差异（P=0.0072），见图1。 图1 持续舔咬足时间柱状图 免疫荧光结果显示正常