高效液相色谱的分析技术-原理(陈桂良).pptVIP

定量分析 1 外标法：计算公式： 使用时应注意尽量保持样品溶液和对照品溶液浓度相同（原因？） 使对照品溶液和样品溶液中内标物的浓度一致，否则计算将极为烦琐。该法仅是由于以前仪器的性能还不十分精确，进样体积还不能准确控制的很准时，才采用的。现在随着定量阀和自动进样器的使用，该法使用已越来越少，而且相反会引起不必要的误差，除非进样阀进样量不准时，应急采用。 2 内标法：计算公式： 3 归一化法和自身对照法：为有关物质（杂质）的测定方法。这是通过峰面积的比较来推算出各物质质量比例的方法。目前多采用自身对照法来进行。 (1)归一化法：即一个峰的峰面积（杂质峰）占总峰面积或占主峰面积的多少。由于有关物质测定时，总峰面积的绝大部分均为主峰面积，故两者结果差不多，结果基本一致。 (2)自身对照法：通常是将供试品溶液稀释一定倍数后（通常为100倍）作为对照溶液（这里对照溶液与对照品溶液的区别需要强调一下），将其和供试品溶液分别进样测定，供试品溶液色谱图中的每个杂质峰面积，与对照溶液主成分峰面积进行比较或计算进行对杂质的判断。如比较，直接比峰面积大小，如计算，则采用公式计算杂质含量 。 UPLC(UFLC,RRLC等) 色谱柱（耐压、稳定的小颗粒填料 ） 色谱仪（耐压的色谱系统(15,000psi) ） 快速进样器 快速检测器 系统体积的优化等 小颗粒填料 罗红霉素HPLC色谱图 范德米特(van Deemeter)曲线 UPLCTM与HPLC：速度比较 喹诺酮类抗生素液相色谱分析 硫酸庆大霉霉素 发现更多组成信息 UPLC-MS 强分离能力有助于目标化合物与之竞争电离的杂质的分离，从而可以使质谱检测器的灵敏度因离子抑制现象的减弱或克服而得到进一步的提高 流速大而使受影响 小结 1. 简介 2. 基本概念、定义和色谱理论 3. 色谱柱和色谱模式 4. 仪器 5. UPLC 学习动物精神 11、机智应变的猴子：工作的流程有时往往是一成不变的，新人的优势在于不了解既有的做法，而能创造出新的创意与点子。一味 地接受工作的交付， 只能学到工作方法 的皮毛，能思考应 变的人，才会学到 方法的精髓。 学习动物精神 12、善解人意的海豚：常常问自己：我是主管该怎么办才能有助于更好的处理事情的方法。在工作上善解人意， 会减轻主管、共 事者的负担，也 让你更具人缘。 * * * * A majpr advantage of the Agilent MSD Trap is its integration with other completely Agilent systems. Here we see the new Agilent 1100 Cap-LC system. 按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较 吸附色谱 分配色谱 离子色谱 体积排阻色谱 亲和色谱 固定相 全多孔固体吸附剂 固定液载带在固相基体上 高效微粒离子交换剂 具有不同孔径的多孔性凝胶 多种不同性能的配位体键联在固相基体上 流动相 不同极性有机溶剂 不同极性有机溶剂和水 不同pH值的缓冲溶液 有机溶剂或一定pH值的缓冲溶液 不同pH值的缓冲溶液，可加入改性剂 分离原理 吸附与解吸 溶解与挥发 可逆性的离子交换 多孔凝胶的渗透或过滤 具有锁匙结构络合物的可逆性离解 色谱柱和色谱模式 3.1正相色谱（normal phase chromatography） 3.2 反相色谱（reverse phase chromatography） 3.3离子对色谱（ion-pair chromatography） 3.4 离子交换和离子色谱（ion-exchange and ion chromatography） 3.5 疏水作用色谱（hydrophobic interaction chromatography） 3.6 亲和色谱（affinity chromatography） 3.7 排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC） 3.8凝胶渗透色谱（GPC） 正相色谱（normal phase chromatography） 在正相色谱中，使用极性固定相和非极性流动相进行分离。为了提高流动相的极性，可以加入适当浓度的调节剂，比如甲醇或乙腈。大多数正相色谱柱使用的是酸性和极性的裸露硅胶。酸性的表面硅醇基是亲水性的，与溶质分子中的各种功能团发生各种不同作用。流动相的亲脂性也会影响表面的优先溶解或优先吸附。 正相色谱使用的硅胶的缺点 ①产品取决于硅胶的活性，导致分离效果较差，且不同柱之间、不同牌子之间的差异较大；②强极性溶质在固