真核基因表达调控预案.ppt

* 真核基因表达调控 2011.12 * 富含脯氨酸域 富含脯氨酸的结构域(proline-rich domain)主要结合GC框，如核转录调控因子CTF/NF-1家族，Ap2等的CTF家族的C端区域，脯氨酸残基达20％~30％，与转录激活有关。 GAL4，GCN4含有富含脯氨酸激活结构域。C端肽链有一个特殊区域与激活基因转录功能有关，是一类新转录激活结构。将此区域与异源的Spl结合DNA的锌指结构域嵌合，产生的杂合蛋白可对异源性SV40启动子表现出促进转录活性。说明来自Spl的锌指结构是DNA的结合域，而来自CTF/NF-1的富含脯氨酸基团区域是转录活化的结构域。 还有些转录调控因子富含Ser或Thr残基的激活结构域。有些激活域则无任何特殊氨基酸残基，这些不同的类型反映了在细胞内转录激活机制的复杂性。 * 真核基因表达调控 2011.12 * （3）二聚化结构域 许多转录因子含有介导蛋白质二聚化的位点，二聚体的形成对转录因子行使特定功能有重要作用。二聚化结构域是促使蛋白质单体之间相互作用并最终形成功能性二聚体甚至四聚体的主要部分。因为DNA结合蛋白大多都不能以单体形式结合靶基因序列，一般都是形成二聚体才能发挥作用。 有两种方式发生： ①单体相互作用形成蛋白质二聚体，促进对单一DNA靶位点的结合； ②结合在不同DNA位点的特异激活因子可以协同激活某一个基因。 * 真核基因表达调控 2011.12 * 例如，Jun-Fos异源二聚体(heterodimer) Jun和Fos是jun和fos基因(原癌基因，在某些肿瘤发生中起作用)的产物。Jun和Fos蛋白的DNA结合域属于bZIP家族。Jun二聚体是激活因子AP1的一种形式，但Jun和Fos异源二聚体结合DNA的能力比Jun二聚体更牢固(Fos二聚体不结合DNA)，所以大部分APl的自然形态是Jun-Fos异源二聚体。 * 真核基因表达调控 2011.12 * 11.7.3 转录激活因子结合DNA的结构基序 调节蛋白与DNA之间存在着复杂的相互作用，包括： ①磷酸基团与带正电荷氨基酸残基之间的离子键； ②亲水性氨基酸与磷酸基； ③糖基或碱基与氨基酸之间的氢键； ④芳香氨基酸与碱基之间的杂环分子平面堆积作用； ⑤非极性氨基酸与碱基形成的疏水相互作用等等。 通过对多个较弱的非共价键加以组合，可使DNA-蛋白 质的结合具有很高的强度和特异性。 归纳以下有典型特征的结构模式： * 真核基因表达调控 2011.12 * 结合结构域中的α螺旋或β折叠形成特定的组合，在X-射线衍射花样和核磁共振(NMR)图谱中呈现出各自的特征，对应的模式称为基元或基序 motif。 在各种结构基序中，锌指、螺旋-环-螺旋和亮氨酸拉链最普遍，占已知转录因子80％。 常见蛋白与DNA结合区域一些特殊结构基序有以下几种： * 真核基因表达调控 2011.12 * （1）螺旋-转角-螺旋结构基序(helix-turn-helix，HTH) 最初在研究原核细胞降解物基因活化蛋白CAP和噬菌体Cro阻遏物过程中发现 果蝇同源异型基因编码的具有同源异型域蛋白(homeo-domain，HD) 第一个被证实螺旋-转角-螺旋蛋白，含HD结构的蛋白存在于所有真核细胞中。 * 真核基因表达调控 2011.12 * 这类结构由α螺旋及连接它们的β转角结构组成，靠近C端的 l 段螺旋与DNA大沟中碱基直接接触，称为识别α螺旋，其它螺旋没有特异性，与DNA骨架相接触。 * 真核基因表达调控 2011.12 * HTH蛋白与DNA结合时形成对称同二聚体。 同源异型域蛋白的C端部分形成3个螺旋，与Cro蛋白的HTH区同源，其中螺旋3卧于大沟，结合其中的特异性碱基及磷酸骨架，N-端区域则深入小沟，提供辅助亲和力 (图) * 真核基因表达调控 2011.12 * （2）锌指结构基序(zinc finger， ZF) 1985年，A Klug在研究非洲爪蟾由RNA聚合酶Ⅲ催 化的5S rRNA基因转录的转录因子TFⅢA时，发现了 锌指结构基序(zinc finger，ZF)，它由344个AA组成 的第一个被发现的锌指蛋白，由此提出了锌指结构的 概念。这类结构主要见于真核生物的调节因子。 每个TFⅢA分子含7~11个Zn2+和9个有规律的重复单位，每个单位约30个aa残基组成独立结构域，其中23个残基构成锌指的突起部分，包括Cys、His各1对及其他保守残基，基部突起的环形肽段回折成手指状. 锌离子是形成和维持结构的关键 * 真核基因表达调控 2011.12 * 非洲爪蟾Xfin蛋白 锌指结构 Zif268锌指结构 * 真核基因表达调控 2011.12 * 分子