GFP融合蛋白进行蛋白质的亚细胞定位剖析.pptVIP

第三章 蛋白质定位的方法 第二节 利用绿色荧光蛋白融合蛋白法定位蛋白质的方法 本节课的主要内容 蛋白质定位 绿色荧光蛋白 绿色荧光蛋白融合蛋白的构建 绿色荧光蛋白融合蛋白的检测 其它荧光蛋白简介 蛋白质定位 真核细胞具有复杂的亚细胞结构。每种细胞器都有一组特定的蛋白。 真核细胞除叶绿体，线粒体能少量合成蛋白外，绝大部分蛋白是在胞浆或糙面内质网合成，最终运至不同地点，形成成熟的蛋白质并行使功能。 译产物中很大一部分是以前体蛋白形式存在，往往有蛋白分子定位信号，可引导蛋白质在胞内定位。 蛋白质在细胞内的定位问题，是细胞生物学研究的中心问题，也是分子生物学研究的热门话题。理解某些蛋白质的定位从而分析探索其生物学功能，意义重大。 蛋白质定位 蛋白质的亚细胞定位常用方法： 蔗糖密度梯度离心；免疫胶体金标记；免疫荧光；与GFP构建融合基因表达融合蛋白；多糖序列分析等。 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP) 2008年诺贝尔化学奖 GFP的结构特点 GFP的发光机理 GFP的荧光特性 GFP的优点 GFP的改进 GFP的应用 2008年诺贝尔化学奖 2008年诺贝尔化学奖 下村修：于1962年在水母Aequorea victoria发现并分离得到GFP，并发现该蛋白在紫外线下会发出明亮的绿色。 马丁·查尔菲 ：证明了GFP作为多种生物学现