质谱条件的优化策略(简化板)介绍.pptVIP

液质分析条件的优化策略（简化板） 液相色谱与液质联用仪使用的要点 质量校正的正确 对于相关分析要有合适的支持软件（Maxnet，TargeLyness） 合适的液相色谱平台 合适的质谱接口方式 液相色谱分析中合适的色谱柱的选用 质谱检测模式的选择 必要的后液流补充 质量校正的正确（Myoglobin校正） 质量校正的正确（Myoglobin校正） 质量校正的正确（CsI校正）的肽测定 质量校正的正确（CsI校正）的蛋白测定 质量校正的关键点 针对不同的分析采用不同的校正，一般蛋白质采用Myoglobin，对于小分子分析建议采用CsI校正。 对于采用Myoglobin校正的建议采用高次方的校正曲线（3-4）；对CsI校正的建议采用低次方的校正曲线（1-2） 合适的液相色谱平台 能提供一个连续、稳定的液流环境 真空脱气设备 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 必要的液相色谱辅助配件 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台 合适的液相色谱柱 柱内径：2.1mm 柱长度： 根据分析的目的选择50mm或150mm 柱填料选用新型的填料： Symmetry，Discovery，Vydac，Zorbax，Xterra，Intersil，Diamonsil等 Change Retention to Improve Resolution – Select Solvents/ Modifiers that are MS Compatible Volatile buffer – minimize instrument downtime Buffer concentration: High ? ion suppression decreases ESI sensitivity Low ? system adequately buffered? pH range permitted by stationary phase Methanol or acetonitrile Start with acetonitrile Useful pH Ranges for Volatile Buffers Buffers normally used in LC/MS : Effect of Buffer on Analyte Response Mobile Phase pH effect on ESI Column : HyPURITY? C18 5?m, 50x2.1mm Aqueous mobile phases: 0.1% Formic acid pH 3, Ammonium formate 20 mM pH 5, Ammonium acetate 20 mM pH 8.2, Ammonium acetate 20 mM pH 9, Ammonium acetate 20 mM Aqueous/methanol (50:50) Flow rate: 0.2 ml/min Temperature: 25°C Detection: +ESI, 450°C, 4.5kV, 20V -ESI, 450°C, 3.5kV, 20V Scan: 120 – 480u Analytes: Nortriptyline Propranolol Tetracycline Caffeine Paracetamol Tryptophan Salicylic acid Nicotinic acid Effect of Mobile Phase pH on +ESI Response Effect of Mobile Phase pH on -ESI Response LC/MS Sensitivity vs. Mobile Phase ModifierGluC Digest of BS Proposed Mechanism for TFA Signal Suppression and the TFA-Fix Signal Suppression due to Additives Ion pairing with analyte, surface tension effect Solutions: Post-column addition of a sheath liquid of propionic acid (10%) in 2-propanol (TFA Fix) Use low concentrations of TFA with acetic acid (TFA Light) Replace TFA 离子化方式 极性化合物多采用电喷雾（ESI），其中含氮