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第七章??? 细胞培养技术及动力学 Operation of bioreactor 反应器操作 1. Batch operation 间歇反应 Periods of operation for batch operation 1. Batch operation 2. Semi-continuous or fed-batch operation 半连续操作 本章主要分析讨论间歇培养和连续培养这两种基本方法，然后对其它培养方法进行扩展讨论。 7.1 微生物反应过程的计量学 化学计量学： 是对化学反应的组成和化学反应转化程度的数量化研究。 A+B C+D 元素平衡法 化学计量学 反应工程学 反应热力学 反应动力学 根据化学计量学，可知有关反应过程中各种反应组分的数量关系。 研究化学计量学的目的是对反应过程进行控制和优化，争取获得最大的经济收益。 微生物反应过程的计量学： 碳源（多种）+氮源（多种）+无机盐（多种）+有机生长因子（多种）+水+氧气 细胞+主产物+副产物（多种）+二氧化碳 对于微生物反应过程，由于参加反应的组分多，代谢途径错综复杂，同时微生物在生长，并且微生物菌体也不能用摩尔—摩尔的对应关系表示其计量关系。所以要用元素平衡的方法对微生物反应进行计量，将是十分复杂和困难的。 工程上又不能回避这个问题，每一个工业化的微生物反应过程都需要计量。 人们提出了一个相对简单的方法，就是引入得率系数（Yield coefficients）的概念，作为描述微生物反应中计量关系的宏观参数。 得率系数有以下几种定义： 1、对基质的细胞得率Yx/s (Monod提出的) Yx/s= = 在分批培养时，培养基的组分在不断地变化，因此在培养过程中细胞得率系数不能视为常数，在某一瞬时的细胞得率称为微分细胞得率（或者称为瞬时细胞得率）。 分批培养过程，总的细胞得率为： Yx/s＝ x0、s0：反应开始时细胞和基质浓度 xt、st：反应结束时细胞和基质浓度 2、对碳的细胞得率Yc 考虑碳源基质时，无论是需氧还是厌氧培养，宏观上碳源的一部分被同化为细胞组成物质，其余部分分别被异化、分解为二氧化碳及其它代谢产物。 为了表示由碳源同化为细胞组成物质过程的转化效益，采用对碳的细胞得率Yc Yc= Yc1?一般在0.4~0.9左右的范围内。 3、对ATP生成的细胞得率YATP 微生物通过基质的氧化而获得细胞合成、物质代谢、物质传递过程等生命活动所必需的能量。但是它并不是利用了基质氧化的全部能量，而只有在氧化反应中以生成ATP形式获得自由能，被微生物生命活动所利用，其余部分作为反应热释放到环境中。 据此，ATP的生成量和细胞生长量有关联，以异化代谢过程中ATP的生成量作为细胞得率的基准。YATP表示为： YATP＝ 根据大量实验发现，在厌氧培养时，YATP值与微生物、基质的种类无关，基本上为常数，YATP=10 Yield coefficients Biomass / substrate: Yx/s = -△x / △s Product / substrate: Yp/s = -△p / △s Product / biomass: Yp/x = -△p / △x 7.2 微生物反应动力学的描述方法 细胞生长动力学 微生物反应动力学 反应基质消耗动力学 代谢产物生成动力学 1、模型的简化 细胞的生长、繁殖代谢是一个复杂的生物化学过程。该过程既包括细胞内的生化反应，也包括胞内与胞外的物质交换，还包括胞外的物质传递及反应。该体系具有多相、多组分、非线性的特点。 多相指的是体系内常含有气相、液相和固相； 多组分是指在培养液中有多种营养成分，有多种代谢产物产生，在细胞内也具有不同生理功能的大、中、小分子化合物； 非线性指的是细胞的代谢通常需用非线性方程来描述。 同时，细胞的培养和代谢还是一个复杂的群体的生命活动，通常每1ml培养液中含有104~108个细胞，每个细胞都经历着生长、成熟直至衰老的过程，同时还伴有退化、变异。 因此，要对这样一个复杂的体系进行精确的描述几乎是不可能的。为了工程上的应用，