紫外可见分光光度计在生物医学中的应用介绍.ppt

目 录 紫外可见分光光度计简介 DU-730 的结构和原理 DU-730在生物医学中的应用 单一组分分析(Single Componet Analysis) Thank you! * * DU-730 紫外可见分光光度计 在生物医学中的应用 — 晋晓飞 紫外可见分光光度计简介 DU-730 的结构和原理 DU-730在生物医学中的应用 分光光度计，又称光谱仪(spectrometer)，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。 紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。 紫外/ 可见分光光度计作为一种分子吸收光谱仪, 广泛应用于化学研究、生物医药、环境科学和食品分析等研究领域。它具有分析精度高、应用范围广、分析简便快速和仪器灵敏度较高的优点。 美国BECKMAN 公司的DU-730 紫外/ 可见分光光度计, 是目前最具先进性的全波长分光光度计。 结构组成： DU-730 分光光度计的基本组成和大多数分光光度计一样, 都是由光源、单色器、比色池、光电检测器和放大器几部分组成。 光源： 仍是采用卤素钨灯和氘灯。卤素钨灯的工作波长范围为:320 ～ 2500nm, 氘灯的工作波长范围为180 ～ 375nm。两光源有仪器上的一个灯选择反射镜自动进行选择光源切换。 单色器：DU-730是采用先进的光栅单色器, 由入射狭缝、出口狭缝、色散元件、准直镜等光学元件组成。色散元件是单色器中的核心元件，起着将复合光分解为单色光的作用。DU-730 分光光度计的色散元件是凹面反射式全息光栅 　比色池：DU-730 分光光度计配有多种规格样品池架和比色杯。池架有标准池架、七位池架、50μL 微量池架和多形态样品池架。比色杯有常量(2 ～ 4mL)、半微量(0.5 ～ 1mL) 和微量(50 ～ 100μL), 使用方便。另外还配有样品架卡套, 分为特为酶动力学设计的半导体温控池: 温度范围15 ～ 50℃ , 和流动池。 微聚焦光束技术 BECKMAN 公司的DU-730 分光光度仪的先进之处在于: 在做微量分析时，当光束进入比色杯池前采用了该公司的专利技术—“微聚焦光束技术”,可以集中光源于样品上，避免光量的流失，大大提高了仪器检测的灵敏度和结果的精密度。聚焦的光源能量全部穿过样品中,没有损失。而普通的微量分析存在光能量的损失( 高达80%), 单一波长测定(Fixed Wavelength) 全波长扫描(Wavelength Scan) 核酸分析（Nucleic acid analysis） 动力学/ 时间分析(Kinetic/Time Mode) 蛋白质浓度测定（Protein concentration determination） 单一组分分析(Single Componet Analysis) 单一组分分析也是分光光度计很有用的一个功能, 它能准确定量出样品中某种组分的含量。用这一分析模式进行测定时，先要通过对一系列已知浓度的标准溶液X 值进行测定，读出一系列响应值Y 吸光值 ，由已知浓度X 值和响应值Y 计算出线性方程Y=bX+a，仪器自动计算出给出线性方程的斜率（b）、截距(a)、CV(%) 值等参数, 然后利用该回归方程求出未知样品的浓度值。当测定未知样品时, 仪器能自动给出浓度值, 非常快速准确。此模式多用于组织或细胞的生化物质( 蛋白、维生素、盐离子等) 浓度测定等。 DU-730 分光光度计除能测定多种生化物质含量，还能进行核酸的生物学分析。这里包括:dsDNA、ssDNA 和RNA 浓度测定，以及有关核酸的其他分析，如: 核酸的纯度、延伸盒系数、融解温度(Tm) 等，方便快速。 核酸分析（Nucleic acid analysis） 动力学/ 时间分析(Kinetic/Time Mode) 当我们在研究细胞损伤时，可以通过对细胞内的线粒体通透性转换孔(mTPT) 的测定来判断线粒体受损后的肿胀程度进而推测细胞的损伤程度。实际操作就是: 通过测定线粒体在高糖溶液中的透光率(%T)的改变，即当心肌细胞发生病理改变时回开放mPTP使线粒体发生肿胀，样品的透光率就会下降，监测线粒体溶液的透光率动态曲线下降的情况，就直接反映出线粒体的水肿情况，间接地反映了细胞的损伤和凋亡，这对研究细胞的损伤和保护提供了有科学的实验证据。 DU-730 分光光度计能用多种方法测定蛋白浓度, 如:Bradford 法、Lowry 法、紫外吸收法和目前国内外普遍采用的BCA 法, 可以根据需要, 选择分析模式。