第十三章遗传工程动物讲述.pptVIP

* 二、逆转录病毒法制备转基因动物 （一）原 理 逆转录病毒是一类具有逆转录酶的RNA病毒，能将病毒RNA逆转录成双链DNA，进而整合到细胞染色体DNA中。利用这个特点，可将逆转录病毒改造成外源基因表达载体，用于基因治疗研究和转基因动物的制备。 逆转录病毒科有三个亚科： RNA肿瘤病毒亚科 慢病毒亚科 泡沫病毒亚科 * 逆转录病毒结构 LTR: Long terminal repeat，在5‘末端具有启动子/调控序列作用，在3’末端具有poly A信号作用。 ψ+：病毒包装信号，具有指导病毒RNA包装成病毒颗粒功能。 Gag：编码核衣壳、衣壳和基质的功能。 pol：编码整合酶和逆转录酶。 env：编码包膜表面糖蛋白和转膜蛋白。 dsDNA mRNA Protein 生物的正常遗传信息流 * （二）用逆转录病毒法制备转基因动物基本步骤 构建病毒载体 转染包装细胞 收集病毒颗粒 感染受精卵 胚胎移植 表达gag, pol, env 细胞 * 逆转录病毒法制备转基因动物的优缺点 优点 转基因效率高 单位点、单拷贝整合 缺点 随机整合 携带外源DNA片段大小受限，一般小于10kb 易产生嵌合体（mosaic) * 三、ES细胞法介导基因敲除小鼠的制备 （一）原理 将ES细胞在体外培养、扩增后，用经过改造的外源基因打靶载体导入ES细胞内，在细胞水平用