拟南芥复制因子C亚基3在植物花器官发育中的功能研究-湖南农业大学.doc

湖南农业大学大学生创新性实验计划项目 中 期 研 究 报 告 项目名称 ： 拟南芥复制因子C亚基3在植物花器官发育中的功能研究 项目编号 ： SCX1035 项目主持人 ： 赵一夫 主持人电话 ： 电子信箱 ： 616663858@ 指导教师 ： 夏石头 学院 ： 湖南农业大学生物科学技术学院 研究起止年月 ： 2010.06-2012.06 湖南农业大学教务处制 年 月 日填报 研 究 进 展 简 况 项目编号 SCX1035 项目名称 拟南芥复制因子C亚基3在植物花器官发育中的功能研究 2010.06 预计结题时间 2012.06 本阶段研究的主要成效 成果名称 级别 项目经费使用情况 项目总经费 20000元 现阶段支出 9000 元 自20世纪90年代开始，拟南芥(Arabidopsis thaliana)成为遗传学、分子生物学特别是发育分子生物学研究领域的首选模式植物。我国在模式植物拟南芥和水稻作物上进行的功能基因组学研究，促进了植物生物学研究的快速发展，为我国21世纪植物科学研究跻身于国际前沿奠定了坚实基础。 复制子C（Replication factor C）最初是在20世纪80年代末从人类Hela细胞提出物纯化的，是猿病毒40DNA体外复制的必需因子。后来研究发现，RFC的五个亚基，一个大亚基（RFC140/RFC1）, 四个小亚基（RFC37/RFC2, RFC36/RFC3, RFC40/RFC4, RFC38/RFC5)在人类、酵母等很多真核生物中都存在。RFC复合蛋白作为一个整体，其在DNA复制和修复及细胞分裂增殖和抗逆生长中的重要功能也逐渐被人们所认识。但是，植物中有关RFC功能研究进展缓慢，与当今功能基因组时代生物科学的飞速发展极不相称。深入研究拟南芥RFC及其各亚基的分子特性和生物学功能，从组织，细胞和分子水平解释其对生长发育的调控作用，是解决当前问题加速科学发展的必要途径。本项目的拟南芥RFCRFC3在拟南芥花器官发育中的重要生理功能可望进一步丰富拟南芥的功能基因组学知识，对于最终完全理解拟南芥的复杂生物学特性，建立参考系统以加深对其他植物如南方主要粮食作物—水稻等相关信息的认识和理解，最终完整认识开花植物的复杂生物学特性具有重要意义。rfc3-1突变体rfc3-1）遗传互补 注：1. 野生型植株; 2. rfc3-1; 3. rfc3-1遗传互补植株 图1 野生型、rfc3-1突变体和rfc3-1突变体的遗传互补植株 先通过PCR扩增野生型AtRFC3基因（genomic DNA或cDNA）序列，再将其重组构建在带Basta筛选标记的PG229重组质粒中，然后进行酶切片段验证和序列测定，并将验证后的阳性克隆质粒用电击穿孔法转入农杆菌GV3101菌株中，再将重组质粒以农杆菌介导法转染入开花的rfc3-1突变体植株中，并鉴定出互补植株。通过对比试验，解析复制因子C亚基3在拟南芥植物花器官发育中的生理功能。 ② 将rfc3-1突变体rfc3-1/rfc3-1 ::pG229RFC3）和野生型拟南芥种子。 将rfc3-1突变体和野生型拟南芥种子同时在播种在拟南芥培养土中，光照培养室内16h光照+8h黑暗条件下培养。 记录组植物中各植株开花所需的时间，花期长短，花器的形状和生长情况。对比分析rfc3-1突变体和野生型生长的区别，包括开花时间的长短，花器形状，生长情况的差异等。 花瓣长宽（mm） BG2 2010.5.28 rfc3-1 2010.5.28 长 宽 长 宽 2.35 0.88 1.66 0.81 1.89 0.85 2.85 0.79 1.98 0.85 2.16 1.21 2.02 0.80 2.39 0.60 2.66 0.88 1.91 0.71 2.59 0.91 2.18 0.53 1.99 1.00 2.43 1.10 2.13 1.12 2.47 0.87 2.03 1.09 1.97 0.99 2.36 0.67 2.69 0.75 2.18 0.90 1.94 0.85 1.99 0.63 2.46 0.91 1.80 0.88 2.60 0.85 1.89 0.68 2.29 0.88 2.38 0.92 2.67 0.98 2.17 1.01 2.06 0.98 2.59 0.95 2.31 0.97 2.87 1.14 2.29 1.20 2.33 1.00 2.40 1.07 2.16 0.89 2.34 0.86 2.