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第18章 高效液相色谱法 High performance liquid chromatography HPLC 二、化学键合相色谱法（BPC）  （bonded phase chromatography） 二、化学键合相色谱法（BPC）  （bonded phase chromatography） 固定相：氰基与氨基化学键合相 分别将氰乙硅烷基 [-Si(CH2)2CN]、 氨丙硅烷基 [-Si(CH2)2NH2]键合在硅胶上而制成 流动相：烷烃（正己烷）加适量极性调整剂 正相键合相色谱主要用于分离极性至中等极性的分子型化合物 分离的一般规律： （二）反相键合相色谱法 （二）反相键合相色谱法 PIC：把离子对试剂加入极性流动相中，被分析的样品离子在流动相中与离子对试剂的反离子生成不荷电的中性离子对，从而增加了样品离子在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增加，改善分离效果。 二、化学键合相色谱法的流动相（p354） HPLC对流动相的基本要求： 化学稳定性好 对样品有适宜的溶解度，要求k在1～10（2～5） 必须与检测器相适应 纯度高、粘度小 三、分离条件的选择（p357） Van Deemter方程式 气-液色谱填充柱： 毛细管开口柱： 三、分离条件的选择（p358） 1 在高效液相色谱中，下述哪种操作，不能改变色谱柱的选择性？（ ） A 改变固定相的种类 B 改变流动相的种类 C 改变填料的粒度和柱长 D 改变流动相的配比 酸碱滴定法—间接滴定法 NH4＋的测定 （Ka＝5.6×10－9） 3. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行如下哪些操作？ A 改变流动相的种类或柱长 B 改变固定相的种类或柱长 C 改变流动相和固定相的种类 D 改变柱长 E 改变填料的粒度 4. 所谓反相液相色谱是： A流动相的极性大于固定相的极性 B 流动相的极性小于固定相的极性 C 流动相不动，移动固定相 D组份与流动相分子间有相互作用力，与固定相分子间无相互作用 5. 用反相色谱法分离弱极性混合物，以甲醇－水为流动相，若增加甲醇的比例，则组分容量因子k与保留时间tR将会： A k与tR均变大 B k与tR均变小 C k变大，tR变小 D k变小，tR变大 6. 选择梯度洗脱方法进行分离的样品主要是： A 同分异构体 B 同系物 C 沸点差异大的混合物 D 极性差异大的混合物 H3BO3 NH4＋＋OH- 凯氏定氮法 H＋ * * 高效液相色谱仪示意图 第一节 HPLC的主要类型和原理 LLC LGC 分配、吸附、离子交换、空间排阻色谱法 化学键合相色谱法 离子抑制色谱法、离子对色谱法 BPC：以化学键合相为固定相的色谱法。 化学键合相：用化学反应的方法将固定液的官能团键合在载体的表面上而形成的填料。 优点：均一性和稳定性好、不易流失、使用周期长、柱效高、重现性好、选择性高 分类： 正相：流动相的极性＜固定相的极性反相：流动相的极性＞固定相的极性 注意事项：pH 2～8 （一）正相键合相色谱法 （一）正相键合相色谱法 极性强的组分的容量因子k大，后洗脱出柱。 流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分的k减小，tR减小。 1. 非极性键合相 固定相：十八烷基（ODS，C18） 流动相：甲醇-水、乙腈-水 2. 保留行为的主要影响因素 （1）溶质的分子结构： 溶质的极性越弱，k越大，tR越大 （2）流动相：有机溶剂含量增加， k变小 用反相色谱法分离弱极性混合物，以甲醇－水为流动相，若增加甲醇的比例，则组分容量因子k与保留时间tR将会： A k与tR均变大 B k与tR均变小 C k变大，tR变小 D k变小，tR变大 （三）反相离子对色谱法 paired ion chromatography （PIC IPC） 概念及意义 分离可离子化或离子型的化合物 离子对试剂 分析碱类——烷基磺酸盐 分析酸类——四丁基季铵盐 分离机制 （