6第六章生产菌种的培养与保藏1已资料.ppt

第六章 生产菌种的培养与保藏 第一节 种子制备的过程 第二节 种子质量的控制 第三节 菌种保藏与复壮 种子扩大培养： 是指将保存处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。 第一节 种子制备的过程 种子制备一般包括两个过程，即孢子制备过程和生产大量菌丝的种子制备过程。 一、孢子制备 1.放线菌孢子的制备： 使用C、N源不太丰富的琼脂斜面培养基，一般28℃，5-14D 菌种入罐方法两种：孢子进罐和摇瓶菌丝进罐 2.霉菌孢子的制备：使用天然农产品为培养基，25-28℃，4-14D 3.细菌孢子的制备：使用C限量而N丰富的琼脂斜面培养基， 一般37℃ ，1-2D 4.对于不产孢子的细菌，一般采用斜面营养细胞保藏法，在斜面培养基或者摇瓶液体培养基上活化，然后作种子罐种子。 二、种子制备 种子制备是将固体培养基上培养出的孢子或菌体转入到液体培养基中培养，使其繁殖成大量菌丝或菌体的过程。 母瓶培养 摇瓶种子制备 子瓶培养 种子罐种子制备:一级种子罐、二级种子罐、三级种子罐。 第二节 种子质量的控制 种子质量的优劣，主要取决于菌种本身的遗传特性和培养条件两个方面。 一、影响孢子质量的因素及其控制 二、影响种子质量的因素及其控制 第二节 种子质量的控制 一、影响孢子质量的因素及其控制 （一）培养基：蛋白胨、琼脂、水质、氨基酸 制备固体培养基时有两条经验： ①生产用孢子培养基或作为制备砂土孢子或传代所用的培养基要用比较单一的氮源，以便保持正常菌落类型的优势； ②选种或分离用的平板培养基，则需采用较复杂的有机氮源，目的是便于选择特殊代谢的菌落。 一、影响孢子质量的因素及其控制 （二）培养温度和湿度 要获得高质量的孢子，其最适温度区间很狭窄。 菌体的糖代谢和氮代谢的各种酶类，对温度的敏感性是不同的。 斜面孢子培养时，培养室的相对湿度对孢子形成的速度、数量和质量有很大影响。 一、影响孢子质量的因素及其控制 （三）培养时间和冷藏时间 1．孢子的培养时间 丝状菌在斜面培养基上的生长发育过程可分为五个阶段：①孢子发芽和基质菌丝生长阶段；②气生菌丝生长阶段；⑧孢子形成阶段；④孢子成熟阶段；⑤斜面衰老菌丝自溶阶段。 2．孢子的冷藏时间 因菌种不同而异，总的原则是冷藏时间宜短不宜长。 一、影响孢子质量的因素及其控制 （四）接种量 接种量过大或过小均对孢子质量产生影响，接种量的大小影响到在一定量培养基中孢子的个体数量的多少，进而影响到菌体的生理状况。凡接种后菌落均匀分布整个斜面，隐约可分菌落者为正常接种。 接入种子罐的孢子接种量对发酵生产也有影响。 除了以上几个因素需加以控制之外，要获得高质量的孢子，还需要对菌种质量加以控制。用各种方法保存的菌种每过1年都应进行1次自然分离，从中选出形态、生产性能好的单菌落接种孢子培养基。制备好的斜面孢子，要经过摇瓶发酵试验，合格后才能用于发酵生产。 二、影响种子质量的因素及其控制 种子质量主要受孢子质量、培养基、培养条件、种龄和接种量等因素的影响。 二、影响种子质量的因素及其控制 1.培养基： 选择有利于孢子发芽和菌丝生长的培养基，营养成分要适当地丰富和完全，使菌丝粗壮并具有较强的活力。 培养基的营养成分要尽可能地和发酵培养基接近，以适合发酵的需要， 种子培养基的pH要比较稳定，以适合菌的生长和发育。 二、影响种子质量的因素及其控制 2.培养条件 种子培养应选择最适温度 通气搅拌的控制 不同时期的需氧量不同；通气搅拌不足可引起菌丝结团、菌丝粘壁等异常现象；泡沫影响正常的通气搅拌，应控制培养基的消毒质量，甚至考虑改变培养基配方，以减少发泡。 二、影响种子质量的因素及其控制 3.种龄 种龄：种子培养时间称为种龄。 菌体的生理活性因不同的生长阶段而差别很大，接种龄的控制就显得非常重要。 最适的种龄一般都选在生命力极为旺盛的对数生长期，菌体量尚未达到最高峰时移种。 对数生长期的种子能很快适应环境，生长繁殖快，可大大缩短在发酵罐中的调整期，缩短在发酵罐中的非产物合成时间，提高发酵罐的利用率，节省动力消耗。 种龄过于年轻的种子接入发酵罐后，往往会出现前期生长缓慢、泡沫多、发酵周期延长以及因菌体量过少而菌丝结团，引起异常发酵等等。 种龄过老的种子接人发酵罐后，则会因菌体老化而导致生产能力衰退。 影响最适种龄的因素： 最适种龄因菌种不同而有很大的差异。（细菌、霉菌、放线菌的种龄区间不同） 同一菌种采用不同的工艺条件，其最适的