第二章酶制剂发酵生产ppt.ppt

聚醚类 聚氧丙稀甘油和聚乙烯氧丙稀甘油（泡敌） 硅酮类 聚二甲基硅氧烷与其衍生物。 （6）空气灭菌 介质过滤除菌 让含菌空气通过过滤介质以阻截空气中所含微生物，而去的无菌空气的方法，目前工业除菌几乎均采用该方法。 常用的过滤介质有棉花、活性炭或玻璃纤维等。 第四节 提高酶产量的方法 一、通过条件控制提高酶产量114 1、添加诱导物 适用：诱导酶类，效果十分显著。 关键：选择诱导物及诱导浓度 诱导物种类：底物类似物；底物或诱导物前体或衍 生物； NOTICE： 诱导与阻遏无明显界限，关键在于浓度选择 诱导物浓度对酶诱导形成速率有一定影响。 诱导潜伏期 2、降低阻遏物浓度 分解代谢引起： 适宜的碳源种类很重要 Exp.甘露糖作为碳源生产纤维素酶比使用半乳糖酶活力提高了1500倍。 经济角度必须采用导致分解代谢的碳源—— 限量添加或连续发酵 Exp. 采用限制葡萄糖的连续流加法发酵时，大肠杆菌的β—半乳糖苷酶产率提高60倍。 二、其他提高酶产量的方法 1、添加产酶促进剂 通常是表面活性剂：tween-80，Triton X-100（曲拉通X-100），聚乙二醇辛基苯基醚）等，它们对微生物无毒，或毒性极小。 浓度比较重要，一般有一个最高极限。 2、改变碳氮比 碳氮比(C／N)一般是指培养基中碳元素(C)的总量与氮元素(N)总量之比。 一般蛋白酶生产采用碳氮比低的培养基比较有利； 淀粉酶生产的碳氮比一般比蛋白酶生产略高； 在微生物酶生产过程中，培养基的碳氮比也因培养过程不同而异。 例如在枯草杆菌BF-7658生产α-淀粉酶的发酵过程中，发酵前期要求培养基的碳氮比适当降低，以利菌体生长繁殖，发酵中后期要求培养基的碳氮比适当提高，以促进α-淀粉酶的生成。 3、通气搅拌对酶生产的影响 一般，通气量少对霉菌的孢子萌发和菌丝生长有利，对酶生产不利； 利用细菌进行酶生产时，一般培养后期的通气搅拌程度也比前期加强，但也有例外的情况； 三、基因工程手段提高酶产量的方法 * * * * * * 第二节 产酶微生物的筛选 动物 酶 植物 微生物 微生物易于大量培养，倍增时间短； DNA技术使微生物生产特殊作用的酶，并大大提高产量； 因此，微生物可以说是酶商业化生产的最佳来源。 1、产酶菌的分布规律 为获得能够降解某种物质的产酶菌株，一般可以从该物质比较丰富的地方寻找。 Exp. 豆科植物的根系中，往往存在根瘤菌； 油田和炼油厂周围土层中常见分解石油的微生物； 处理降解合成物质的产酶菌则往往能在污水处理处获得； 生产性能鉴定主要通过初筛和复筛确定。 初筛是从已分离出来的菌种中挑出能产生目标酶的菌株，要求检出方法快捷、简便 初筛多选用平板培养透明圈法 2、菌种生产性能鉴定 细胞外的水解酶 1、溶解度——不溶性底物如淀粉、纤维素、酪素、细胞壁等培养基中生长——透明圈大小 2、酸碱度——酸碱指示剂——变色圈大小和颜色 3、颜色——合成特定底物与酶反应变色——变色深浅 复筛是在初筛的基础上筛选产酶量高，性能更符合要求的菌株，要求测定方法准确可靠。 复筛多采用摇瓶培养的方法。将初筛出来的菌种移入三角瓶振荡培养，对产物进行分析检定，找出产酶量最高，性能符合要求的菌株。 第三节 酶的液体深层发酵法 液体深层发酵是现代普遍采用的方法，主要设备发酵罐是一个具有搅拌浆和通气系统的密闭容器。国内多采用10-50t，国外多用100t以上。 液体发酵流程图 实验室种子制备阶段 （一级种子培养） 生产车间种子制备阶段 （二级种子培养、 三级种子培养） 二级发酵 三级发酵 沙土孢子 冷冻干燥孢子 斜面孢子 摇瓶液体培养 固体培养基培养 一级种子罐 二级种子罐 发酵罐 空气 空气净化处理 保藏菌种 斜面活化 扩大培养 种子罐 主发酵 碳源、氮源、无机盐等营养物质 灭菌 酶分离纯化 成品（液体或颗粒） 控制t、 pH、 DO、 泡沫、 补料等 发酵罐发酵全过程动画.exe （1）温度的调节控制 Exp.不同的细胞有各自不同的最适生长温度。如：枯草杆菌最适生长温度34～37℃，黑曲霉28～32℃，植物细胞25℃左右。 温度控制的方法一般采用热水升温，冷水降温，故此在发酵罐中，均设计有足够传热面积的热交换装置，如排管、蛇管、夹套、喷淋管等。 （2）pH的变化与控制 培养基的pH值与细胞的生长繁殖以及发酵产酶都有密切关系。 细胞发酵产酶的最适pH值通常接近于该酶反应的最适pH值。 例如：发酵生产碱性蛋白酶的最适pH值为碱性(pH8.5～9.0)；而酸性(pH4.0～6.0)条件有利于酸性蛋白酶的产生。 有些细