凋亡实验Qiu剖析.pptVIP

方 法 设空白组、正常对照组、加药实验组 （1）细胞传代∶将贴壁生长的肝癌细胞用0.25%胰酶消化终止后，调整细胞密度为5×104个/ml,每孔100μl传于96孔板A、B、C、D四个排孔内，待细胞培养至指数生长期时加药。 （2）每孔加入不同剂量的大蒜素（1、5、10 ml），每种剂量加三孔，以药物溶剂作对照，将培养板放回37℃继续培养0.5h； 1ul 10ul 1ul 5ul 10ul 第1组 2 3 4 5 6 7 8 5ul 10ul 10ul 大蒜素 剂量 对照组 方 法 （3）于各孔加入10ml 5mg/ml MTT， 37℃培养3-4h；（细胞在SDH作用下把黄色MTT还原成紫兰色结晶）。 （4）吸弃培养液，各孔加入100μlDMSO，将培养板振荡10～20分钟，37℃培养10min 。 （5）用酶联仪测定光密度值（以空白调零），通过与对照组比较得到实验组的存活率。 结 果 （1）加MTT4小时后，倒置相差显微镜下观察可见黄色的MTT被还原成紫蓝色颗粒，加DMSO后紫蓝色颗粒溶解。 （2）各组OD值取平均值后，以下式计算存活细胞百分数∶