第八章节动物遗传操作ppt.ppt

一、概述 转基因动物（transgenic animal）是指基因组中整合有外源基因的动物，将外源基因导入动物基因组的技术称为转基因技术。 转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰。它结合了细胞生物学、基因工程和胚胎工程等相关技术，被公认为是遗传学研究中继21世纪初的连锁分析、20C世纪60年代的体细胞遗传和20世纪70年代的基因克隆之后的第四代遗传操作技术。 二、转基因动物的制作方法 （一）原核期胚胎的显微注射 （二）精子载体法 （三）逆转率病毒感染动物早期胚胎 （四）胚胎干细胞介导法 （五）转基因克隆动物技术 （一）原核期胚胎的显微注射 目前最常用的转基因动物生产方法，又称DNA显微注射法，即通过显微操作仪将外源基因直接用注射器注入受精卵，利用外源基因整合到DNA中，发育成转基因动物。此方法目前应用较普遍，现在的转基因动物研究大都是在Palmiter等方法的基础上有所改进而进行的。这种方法的特点是外源基因的导入整合效率较高，不需要载体不需要载体不需要载体不需要载体，直接转移直接转移直接转移直接转移目的基因目的基因目的基因目的基因。它可以直接获得纯系，所以实验周期短。但需要贵重精密仪器，技术操作较难，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状改变，重则致死 （二）精子载体法 把精子作适当处理后，使其具有携带外源基因的能力。然后，用携带有外源基因的精子给发情母畜授精。在母畜所生的后代中，就有一定比例的动物是整合外源基因的转基因动物。同显微注射方法相比，精子介导的基因转移有两个优点：首先是它的成本很低，只有显微注射法成本的1/10。其次，由于它不涉及对动物进行处理，因此，可以用生产牛群或羊群进行实验，以保证每次实验都能够获得成功。 （三）逆转率病毒感染动物早期胚胎 将目的基因重组到逆转录病毒载体上，制成高浓度的病毒颗粒，人为感染着床前或着床后的胚胎，也可以直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培养细胞共孵育以达到感染的目的，通过病毒将外源目的基因插入整合到宿主基因组DNA中去。 这种逆转录病毒被用重组DNA技术修饰后作为基因载体在应用中优于微注射法之处为：无需要重排，可在整合点整合转移基因的单个拷贝；将胚胎置于高浓度病毒容器中，或者与被感染的细胞体外共同培养，或微注射鸡胚盘里，整合有逆转录病毒的DNA的胚胎率高。 缺点是：需要生产带有转基因的逆转录病毒；插入逆转录病毒的基因有一定的大小限度；所得转基因家畜的嵌合性很高，而需要广泛的杂交，以建立转基因系；转基因的表达问题尚未解决。 （四）胚胎干细胞介导法 是将基因导入胚胎干细胞；然后将转基因的胚胎干细胞注射于动物囊胚后可参与宿主的胚胎构成，形成嵌合体，直至达到种系嵌合。因此，可以将其作为一种载体，导入外源基因，获得转基因动物。即从早期胚胎的内细胞团经过体外培养建立起来的多潜能细胞系 其优点是：在将胚胎干细胞植入胚胎前，可以在体外选择一个特殊的基因型：用外源DNA转染以后，胚胎干细胞可以被克隆，继而可以筛选含有整合外源DNA的细胞用于细胞融合，由此可以得到很多遗传上相同的转基因动物。 缺点就是许多嵌合体转基因动物生殖细胞内不含有转基因; （五）转基因克隆动物技术 转基因克隆动物技术是转基因动物技术与克隆动物技术的有机结合，它是以动物体细胞(包括动物成体体细胞、胎儿成纤维细胞等)为受体，将目的基因以DNA转染的方式导入能进行传代培养的动物体细胞，?再以这些体细胞为核供体，?进行动物克隆。转基因技术与克隆技术结合，创建转基因克隆动物，?已经成为本世纪培育遗传工程动物的主导性技术途径。转基因克隆技术作为一种高效而低成本生产转基因动物的技术已经为转基因动物的生产带来了新的契机。 三、转基因动物的研究现状及应用前景 （一）研究现状 （二）应用前景 （一）研究现状 自1982年美国科学家Palmiter等将大鼠生长激素(GH)基因导入小鼠受精卵中获得转基因“超级鼠”以来．转基因动物已经成为当今生命科学中发展最快，最热门的领域之一。 1985年，美国人用转移GH基因、GRF基因和IGFl基因的方法，生产出转基因兔、转基因羊和转基因猪：同年，德国Berm转人人的GH基因生产出转基因兔和转基因猪； 1987年，美国的Gordon等人首次报道在小鼠的乳腺组织中表达了人的tPA基因； 1991年．英国人在绵羊乳腺中表达了人的抗胰蛋白酶基因。随后．世界各国先后开展此项技术的研究，并相继在兔、羊、猪、牛、鸡、鱼等动物上获得成功。我国在转基因动物研究方面也取得了较大的进展． 1985年首次成功获得转基因鱼．