35DNA的重组2课程.pptVIP

DNA的重组 DNA Recombination Holliday模型中，同源重组主要有4个关键步骤 ①两个同源染色体DNA排列整齐。 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应链连接，形成Holliday中间体。 ③通过分支移动产生异源双链DNA。 ④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA。 同源重组的意义 同源重组是最基本的重组方式，参与各种重要的生物学过程。 同源重组与DNA复制和重组修复过程密切相关。 同源重组在基因加工、整合和转化中起重要作用。 （二）同源重组有关的酶： RecA蛋白 RecA蛋白有两个主要功能：①诱发SOS反应；②促进DNA单链与同源双链分子发生链的交换。 RecA与DNA单链结合时，数千RecA单体协同聚集在DNA单链上，形成螺旋状纤丝。 线性RecA—ssDNA复合物可以通过插入同源的DNA双螺旋的大沟，形成三链DNA中间物，并通过旋转逐渐取代双螺旋DNA中的一条链，与互补链配对，将同源链置换出来，产生新的双链DNA分子，从而完成DNA重组。 RecBCD蛋白 该酶的亚基分别由recB、recC和recD基因编码 该酶具有三种酶活性：①依赖ATP的核酸外切酶活性；②ATP增强的核酸内切酶活性；③需要ATP的解旋酶活性。 该酶利用ATP水解提供能量，沿着DNA链运动，并以较快的速度将前方DNA解旋，当遇到chi（因交换位点的DNA 结构类似于希腊字母χ 而得名）位点（ 5? GCTGGTGG 3? ）时，可在其下游切出3?末端的游离单链。从而使DNA 重组成为可能。 大肠杆菌共有1009个chi位点，分布在DNA的各部位，是重组热点。 （三）细菌的基因转移与重组 1.细菌的接合作用 游离F质粒的接合过程 当F+细胞与F-细胞相遇时，F+细菌性菌毛识别F-细菌，并通过其性菌毛固着F-细菌，再通过回缩与拆卸作用使两细胞彼此靠近，在两细胞间形成菌毛连接 由F+细胞的内膜蛋白—TraD蛋白构成转移通道。 兼有切口酶和解螺旋酶活性的TraI蛋白在TraY蛋白的协助下结合到质粒DNA的转移起点oriT上，并切开F+质粒的一条链，形成单链切口，游离的5?末端向F-细胞转移。 随后在两细胞内分别以单链DNA为模板各自合成互补链，结果F-细胞转变为F+细胞。 整合F质粒的接合过程 整合在宿主染色体中的F质粒发生接合转移时，质粒转移起点被切开，其前导链引导染色体DNA单链转移。 进入受体菌后的单链DNA复制成双链形式，并可与受体菌染色体发生位点特异的重组。但往往不能使受体细胞转变为F+细胞。 整合的F因子被切割时，有时切割不精确而带有部分宿主染色体基因，称为F?因子。 F?细胞与F-细胞杂交时，宿主细胞部分染色体基因随F?因子一起进入了受体细胞，使受体细胞也变成F?细胞。细胞基因的这种转移过程称为性导。 2.细菌的遗传转化(genetic transformation) 转化的过程 转化需有多种酶和蛋白因子参与，如：感受态因子、膜联结的DNA结合蛋白、自溶素及多种核酸酶等。感受态因子可诱导与感受态有关的蛋白表达，自溶素能使细胞表面的DNA结合蛋白和核酸酶暴露。 当外源DNA与细胞表面的DNA结合蛋白结合后，核酸酶使其一条链降解，另一条链被摄取，并与感受态特异蛋白结合转移到染色体，与染色体DNA重组。有的细菌能摄取双链DNA。 3.细菌的转导(transduction) 普通性转导：是指宿主基因组任意位置的DNA成为成熟噬菌体颗粒DNA的一部分而被带入受体菌。 局限性转导：某些温和噬菌体在装配噬菌体颗粒时，将宿主染色体整合部位的部分DNA取代噬菌体部分DNA被切下来，组装成噬菌体颗粒带入受体菌。 1. λ噬菌体DNA的整合与切除 λ噬菌体DNA与宿主DNA的特异重组位点称为附着位点。 噬菌体DNA的附着位点为attP，细菌DNA相应的附着点为attB，二者含有共同的核心序列称为O区。 噬菌体DNA attP位点的序列以POP?表示，细菌DNA attB位点序列以BOB?表示。 2.细菌的特异位点重组 鼠伤寒沙门杆菌由鞭毛蛋白决定的H抗原有两种，分别为H1鞭毛蛋白和H2鞭毛蛋白。但有少数细菌呈现另一H抗原，这种现象称为鞭毛相转变 。 这种抗原相位的改变是由一段995bp的DNA——H片段，发生倒位重组所致。