5第五章酶分子修饰摘要.pptVIP

Chapter 5 Modification of Enzyme Molecule 酶分子修饰 什么是酶分子修饰？ 提高酶的活力 增强酶的稳定性 降低或消除酶的抗原性 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 第一节 金属离子置换修饰 把酶分子中所含的金属离子换成另一种金属离子，使酶的催化特性发生改变的修饰方法。 常用的金属离子 Ca2+，Mg2+，Mn2+，Zn2+，Co2+，Cu2+，Fe2+ 适用性 本来在结构中含有金属离子的酶。 一、金属离子置换修饰的方法 （1）加入一定量的EDTA（乙二胺四乙酸）等金 属螯合物到酶液中，与酶分子中的金属离子螯合； （2）通过透析、超滤、分子筛层析等方法，从酶液中去除 EDTA-金属螯合物； （3）加入另一种金属离子到酶液中，酶蛋白与新加入的金属离子结合。 二、金属离子置换修饰的作用 １、阐明金属离子对酶催化作用的影响 ２、提高酶活力 锌型蛋白酶置换成钙型蛋白酶，酶活力可提高20-30倍；制成晶体，比锌型蛋白酶结晶的酶活力提高2-3倍。 ３、增强酶稳定性 天然含铁超氧化物歧化酶中铁原子被锰取代后,酶的稳定性和抑制作用发生显著改变,重组的含锰酶对H2O2的稳定性显著增强,对NaH3的抑制作用的敏感性显著降低。 ４、改变酶动力学特性 酰化氨基酸水解酶活性部位中的锌被钴取代时,酶的底物专一性和最适pH都有改变,锌酶对N-氯-乙酰丙氨酸的最适pH是8.5,而钴酶的最适pH是7.0,并且对N-氯-乙酰丙氨酸等三种底物的活力降低，Ｋm增大，亲和力降低。 第二节 大分子结合修饰 通过修饰提高酶活力 酶催化剂能力本质上是由其特定的空间结构特别是其活性中心的特定构象所决定 水溶性大分子通过共价键与酶分子结合后可使酶的空间结构发生某些改变，使酶的活性中心更有利于和底物结合并形成准确的催化部位，使酶活力提高。 1分子核糖核酸酶与6.5分子右旋糖酐结合，活力提高2.25倍。 增加酶稳定性 酶的稳定性较低是普遍存在的。采用大分子与酶结合，形成复合物，就可起到保护酶的天然构象的作用，从而增加酶的稳定性。 降低或消除抗原性 抗原能引起体内产生抗体的物质。 抗体当外源蛋白非经口进入人或动物体内后，体内血清中就可能出现与此外源蛋白特异结合的物质称之为抗体。 当酶非经口（如注射）进入人体后，往往会成为一种抗原，刺激体内产生抗体。当这种酶再次注射进体内时，抗体就会与作为抗原的酶特异地结合，使酶失去催化功能。用PEG修饰色氨酸酶可完全消除该酶的抗原性。 第三节 酶蛋白侧链基团修饰 蛋白酶类的修饰 其侧链功能基团有氨基、羧基、巯基、咪唑基、吲哚基、酚羟基、羟基、胍基、甲硫基等，这些基团可组成各种副键对蛋白质空间结构的形成和稳定起重要作用。这些功能基团发生改变，引起副键改变，使空间结构发生某些变化，从而引起酶特性和功能的改变。 氨基的化学修饰 羧基的化学修饰 巯基的化学修饰 巯基在维持亚基间相互作用和酶催化过程中起重要作用，具很强的亲核性，在含半胱氨酸的酶分子中是最易反应的侧链基团。 酚基的化学修饰 分子内交联剂 第四节 肽链有限水解修饰 利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及其空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的方法。 酶蛋白主链修饰主要是靠酶切/酶原激活法。 第六节 氨基酸置换修饰 二、氨基酸置换修饰的方法 1、化学修饰法 ２、定点突变法 蛋白质工程通过改造蛋白质相对应的基因中的碱基排列次序，或设计合成新的基因，将它克隆到寄主细胞中，通过基因表达而获得具有新的特性的蛋白质的技术过程。 第八节 物理修饰 第九节 酶分子修饰的应用 一、在酶学研究方面的应用 １、酶的活性中心研究 ２、酶空间结构研究 ３、酶作用机制研究 （１）亲和标记法 （２）差示标记法 （３）氨基酸置换法 （４）核苷酸置换法 二、在医药方面的应用 １、降低或者消除酶抗原性 ２、增强医药用酶的稳定性 四、在抗体酶研究开发方面的应用 一、抗体酶概述 抗体是和抗原结合的物质。 抗体与靶分子精确匹配。 产生高度特异性和亲和性。 免疫系统可以产生108～1010个不同的抗体分子（多样性 ） 抗体结构 抗体分子是由两条轻链( L链)和两条重链(H链)通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。 1969年， Jentcks根据Panling的化学反应过渡态理论预言，用过渡态类似物，作为半抗原，产生的抗体，该抗体具有酶催化反应的基本特征。 1986年《Science》同时发表了两篇来自由Lemer和Schultz分别领导的两个研究组的发现具有酶催化能力的抗体研究报告，揭开研究抗体酶的热潮。 取得的成果： 天然酶所催化的6种酶促反应 数十种类型的常规反应的