22色层分离法解说.ppt

* 0－40－0－2－7 60％ 1.2ml/min * 0－40－0－2－9 60％ 1.2 * 定量方法 归一化法 标准曲线法 内标法 标准加入法 以上4种方法各有其使用范围选择哪种定量方法，是个十分重要和关键的问题 峰面积法和峰高法 * 用峰面积法还是峰高法，主要决定于检测器的线性范围内，峰高和峰面积测量的准确性和重复性。除了归一化法最好用峰面积法外，其它3种都能用2者精确测量。 * 归一化法 把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法。 组分i的质量分数 fi－组分i的质量（或摩尔、体积等）校正因子 Ai－组分i的峰面积 * 归一化法优点：简便、准确，特别是进样量不容易精确控制时，进样量的变化对定量结果影响很小，其它操作条件，如流速、柱温等变化对定量影响也很小 缺点：校正因子的测量较麻烦，主要用于GC的定量测定。 参考文献：现代预防医学2010 年第37 卷第2 期高效液相色谱法测定双歧杆菌的有机酸代谢产物 * * * 标准曲线法 也称为外标法或直接比较法，比较常用的方法，是比较简便、快速的绝对定量方法（归一化法是相对定量） 采用峰高或峰面积做参数。 要求标准工作曲线应通过原点的直线，否则说明方法存在系统误差。斜率即为绝对校正因子。 * * 内标法 选择适宜的物质作为待测组分的参比物，定量加到样品中，依据待测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法 克服标曲法每次测量时色谱条件很难完全相同的定量误差，准确度提高。同时内标法其比值与进样量无关，消除误差 缺点：选择合适的内标物难；称量哟啊准确、操作麻烦。 * 标准加入法 实质为 特殊的内标法，是在选择不到合适的内标物时，以待测组分的纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下，测定加入待测组分纯物质前后待测组分的峰面积或峰高，从而计算待测组分在样品中的含量方法。 * 测试方法的建立 有机调节比例 A B%相 改善分离 Rs1.5以上、分离时间要求（总时间2h左右；一次测定2～2个样品，运行时间20～30分钟左右）；柱压在50%最大柱压为好。 可重现的分离 方法的普适性 Superdex Pertide凝胶，是专为分子量10 000 以下的肽类或小蛋白的分析及小量制备而设计的。该类凝胶作为高效的GFC填料，对于分子量100-7000 的样品具有相当高的分辨率，甚至相差一两个氨基酸的肽分子亦可得以分离 * * * 色谱网络参考资料 * 补充说明 凝胶渗透色谱 凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography、GPC)1964年，由J.C.Moore首先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离和鉴定，而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。(聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开） * * /News/ShowNewsDetails-2-11-46E8AB7ECF19CA00.html 纸色谱法——分配色谱法 纸色谱法，系以滤纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。 供试品经展开后，可用比移值(Rf)表示其各组成成分的位置（比移值＝原点中心至斑点中心的距离／原点中心至展开剂前沿的距离），但由于影响比移值的因素较多，因而一般采用在相同实验条件下与对照物质对比以确定其异同。 * 作为药品的鉴别时，供试品在色谱中所显主斑点的颜色（或荧光）与位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药品的纯度检查时，可取一定量的供试品，经展开后，按各药品项下的规定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为药品的含量测定时，将主色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定 * 视频操作 /yyx520/blog/item/8c89c9ec68a3053html * 仪器与材料 (1) 展开室 (2)点样器 (3) 滤纸 * 薄层色谱操作视频 中文糖的薄层层析 /v_show/id_XNzEwOTY3NTY=.html /v/b/5015573-1302102924.html /v_show/id_XMjA1MzY1MTQ0.html * * 正相色谱 指采用极性固定相（如二醇基、氨基和氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等）、非极性流动相（如正己烷等）的分离方法。 正相色谱是以吸附效应为分离基础，也称为吸附色谱。极性强的与固定相相互作用难洗脱，极性弱的易洗脱，达到分离目的。 一般用来分离中性和离子化合物。 难点：流动相选择，极性越大，溶质出峰保留值越小，分辨率可能下降；流速。 * 反相色谱 根据溶质极性（疏水性）的差别进行溶质分离纯化的一种洗脱方法。 利用非极性的反相介质为固定相，流动相以水为基础溶剂，再加入一定量的能与水互