基因克隆及功能分析重点.ppt

株系 长根株数 短根株数 021 237 81 022 186 40 024 159 63 026 230 65 * 从广义来讲，蛋白质及核酸等生物大分子结构和功能的研究都属于分子生物学的范畴，也就是从分子水平阐明生命现象和生物学规律。例如，蛋白质的结构、运动和功能，酶的作用机理和动力学，膜蛋白结构功能和跨膜运输等都属于分子生物学的研究内容。 不过目前人们通常采用狭义的概念，将分子生物学的范畴偏重于核酸(或基因)的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程，当然其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 “ 分子生物学 ”术语的来历： 1938年,Weaver在写给一个科学基金会(洛克菲勒基金会)的报告中，首次使用了分子生物学(Molecular Biology )一词…… 之后，研究蛋白质结构的Willian Astbury 使用了这一名词，当时他开始用X—射线分析纤维DNA的结构，并称自己是分子生物学家。 * 上游DNA重组的设计必须以简化下游操作工艺和装备为指导思想，而下游过程则是上游基因重组蓝图的体现与保证，这是基因工程产业化的基本原则。 * 症状是发烧和肌肉疼痛,经过检查发现,他患的是当时人们尚未认识的一种特殊的贫血症,他的红细胞不是正常的圆饼状,而是弯曲的镰刀状。后来,人们就把这种病称为镰刀型细胞贫血症。链上从N末端开始的第6位的氨基酸残基,在正常的HbA分子中是谷氨酸,在病态的HbS分子中却被缬氨酸所代替。 1998年，国际水稻基因组测序计划正式启动，中国以及台湾地区与日本、美国、法国、韩国、印度等一道，成为这一国际组织的成员。中国测第4号染色体，2002年水稻基因组计划完成。 * * * * 蛋白质序列是高度保守的，一般根据已获得的已知蛋白质序列，进行blastp，选择我们需要研究的物种选项，先比对出我们需要的蛋白质序列，然后通过网站链接，找到相应的mRNA（或叫cDNA，或叫coding region）序列 * 基因功能的研究离不开表达载体的构建 * D-TOPO构建入门载体：该技术无需 DNA 连接酶做连接，只需要在设计PCR引物的5端上游加上CACC，以进行定向克隆。 * * 转基因流程 转基因流程 转基因程序 正向遗传学 基因的图位克隆 图位克隆的基本原理 功能基因在基因组中都有相对较稳定的基因座，通过找到与目标性状紧密连锁的分子标记，在利用分子标记技术对目的基因精细定位的基础上，由于某一物种全基因组序列的公布，我们可以得到已定位区段的候选基因，通过对候选基因进行分析，确定目标基因，最后经遗传转化试验证实目的基因功能。 图位克隆的步骤： Primary mapping Fine mapping Candidate gene Complementation test Functional analysis 图位克隆能实现，关键在于全基因组（Col-0生态型）测序计划的完成和各种分子标记的发现。 开发新的标记： 新的SSR标记： /modules/redbtools/ssrscan.php，运行SSRScan就会得到该段序列的简单重复序列。 InDel/Caps标记：将要开发标记的日本晴区段序列与93-11做一个blast，选取插入或者缺失比较大的位点设计引物。 Candidate gene 将最后精细定位区段在/cgi-bin/gbrowse/rice/ 中输入定位区间的物理位置，即可显示出候选基因。 找到候选基因后可对候选基因进行分析以排除非目标基因，可以通过比较扩增，测序，表达量检测及目标性状相关的生化和生理途径等方法来排除。当然最后要说明问题的话就是构建互补载体做一个互补验证。 Complementation test 交换为生物的变异提供了重要的物质基础。 * ?2检验（适合度检验）及应用 ?2检验用于测定试验结果是否符合理论比例。 ?2检验(Chi-square test) 一般同意，当p0.05时，认为实得资料与理论比数间有显著差异，应把假设的分离比否定；如果p0.01时，认为实得数与理论比率间有极显著的差异，自然更有把握把假设的分离比否定了。 * 　 　　自由度(degree of freedom, df)：在统计学中，自由度指的是计算某一统计量时，取值不受限制的变量个数。 df = k – 1，k为类型数，一般为子代分离类型数减1。 例如，子代表现为1:1、3:1时