酶工程4-(9-10)结晶干燥重点.pptVIP

一、影响酶的结晶的因素 1）纯度：酶的结晶并非达到绝对纯化,只是达到相当的纯度而已。 不同的酶对结晶时的纯度要求不同，通常酶的纯度在50%以上,方能进行结晶。 为了获得更纯的酶,一般要经过多次重结晶。 2）浓度：以结晶时酶液浓度应当控制在介稳区,即酶浓度处于稍微过饱和的状态。 酶在结晶时,酶液应达到一定的浓度。浓度过高时,会形成许多小晶核,结晶小,不易长大。 3）其它：结晶过程中还要控制好温度、pH值、离子强度等结晶条件，才能得到结构完整,大小均一的晶体。 二、常用的酶结晶法 1.盐析结晶法 是指在适当的温度和pH值等条件下, 于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度, 使酶的溶解度慢慢降低, 达到稍微过饱和状态, 而析出酶晶体的过程。 中性盐：通常采用的是硫酸铵 操作：一般是把饱和盐溶液慢慢滴加到浓酶液中,在稍微呈现混浊时,让其在一定温度条件下(通常在0～10℃)放置一段时间,慢慢析出结晶。再缓慢而又均匀地补加少量饱和盐溶液,直至结晶完全。 盐析结晶还可以采用抽提法。 抽提法结晶 即将酶液先经过硫酸铵盐析得到酶的沉淀, 再用较高饱和度的冰冷的硫酸铵溶液抽提, 使一部分酶溶解, 分离得到的上清液在室温下放置一段时间, 慢慢析出酶结晶。剩下的沉淀依次用较低饱和度的冰冷硫酸铵溶液抽提。 由于低温时酶在硫酸铵溶液中的溶解度较高