实验七.霉菌、放线菌的形态观察.pptVIP

微生物学实验 生物技术系 陈 敏 实验三霉菌、放线菌形态观察 一、放线菌的形态观察 实验目的 学习并掌握放线菌形态观察的基本方法；初步了解放线菌的形态特征 基本原理 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。大多数放线菌有菌丝体 观察放线菌形态特征的方法 插片法：平板接种 插上灭菌盖玻片 菌丝沿培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上 取盖玻片镜检观察 玻璃纸法：灭菌的玻璃纸覆盖在培养基上 在玻璃纸上接种 培养后，在玻璃纸上形成菌苔 揭下玻璃纸，直接镜检 （以上两种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，便于观察不同生长期的形态） 放线菌的形态观察 实验器材 1）菌种：链霉菌 2）培养基：高氏1号培养基 3）仪器或其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒；以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、石炭酸复红染液、显微镜等 放线菌的形态观察 实验步骤 2）玻璃纸法：倒平板 铺玻璃纸 接种 培养 镜检 放线菌形态 二、霉菌的形态观察 实验目的 学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；了解常见霉菌的基本形态特征。 基本原理 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝的。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同类霉菌的重要依据。 直接制片观察法 将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片观察。该制片的特点是细胞不变形；具有防腐作用不易干燥，能保持较长时间；且能防止孢子飞散；染液的蓝色能增强反差。 载玻片培养观察法 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养。培养一定时间后，将载玻片的培养物直接放在显微镜下观察。该法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 实验器材 1）菌种：青霉、曲霉、根霉 2）培养基：马铃薯琼脂培养基 3）仪器：培养皿、载玻片、盖玻片、U形玻棒、解剖针、解剖刀、镊子、20％甘油以及显微镜等 实验步骤（载片法） 2）琼脂块的制作：取已经灭菌的琼脂培养基6-7ml注入另一个灭菌平皿中，凝固后用解剖刀切成0.5-1cm2的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上。 3）接种：用接种针挑取少量的孢子接种于琼脂块上，用无菌镊子将盖玻片盖在琼脂上。 4）培养：先在平皿的滤纸上加3－5ml灭菌的20％甘油（用于保持平皿的湿度），28℃培养。 5）镜检 曲霉 * * 显微镜下观察时，气生菌丝在上，基内菌丝在下，气生菌丝颜色较暗，而基内菌丝比较透明。孢子丝的形状多样，有螺旋形、波浪形或分支形等，孢子也常呈椭圆形、圆形或杆形。 1）插片法：倒平板 接种 插片 培养 镜检 注：接种可用孢子液涂布平板，要密集一些，以利插片 注：1）铺玻璃纸时，玻璃纸需紧贴平板表面不留气泡；2）镜检时，玻璃纸平贴在载玻片上，中间勿留空气；3）操作过程中，勿碰动玻璃纸菌面上的培养物。 观察霉菌形态常用的三种方法 1）直接制片观察法 2）载玻片培养观察法 3）玻璃纸培养观察法 实验步骤（直接制片观察法） 在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用尖头镊子从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的菌丝放于染液中，盖上盖玻片并用镊子轻压，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。 1）培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张圆滤纸片，再放一U型玻璃棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖包扎后于121℃灭菌30min，烘干备用