实验九动物细胞融合实验的形态学观察.pptVIP

实验九 动物细胞融合实验的形态学观察 一、实验目的 1．了解PEG诱导细胞融合的基本原理。 2．通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术。 二、实验内容 鸡血细胞之间的融合 三、实验原理 在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互靠近的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。 四、实验操作步骤 1．在公鸡翼下静脉抽取2 ml鸡血，加入盛有8 ml的Alsver液中，使血液与Alsver液的比例达1：4，混均后可在冰箱中存放一周 。 2．取此贮存鸡血1ml加入4ml 0.85%生理盐水，充分混均，800rpm离心3min，弃去上清，重复上述条件离心两次。最后弃去上清，加GKN液4ml， 800rpm离心3min。 3．弃去上清，加GKN液，制成10%细胞悬液。 4. 取以上细胞悬液1 ml于离心管，放入37℃水浴中预热。同时将50%PEG液一并预热20min 5. 20min后将0.5ml 50%PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到1 ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min。 6. 20 min后，加入GKN溶液至8ml，静止于水浴中20 min左右。 7. 800rpm离心3min，弃去上清，加GKN溶液再离心1次。 8. 弃去上清，加入GKN液少许，混均，取少量悬浮于载玻片上，加入Janus green染液，用牙签混均，3min盖上盖玻片，观察细胞融合情况。 五、实验结果 1. 计算细胞融合率（融合率=视野内发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数×100%。） 2. 选一理想视野，根据镜下结果绘细胞融合示意图 。 实验完毕请班长安排 同学做好实验室清洁 * *