实验室环境和人体表面微生物的检查.docVIP

实验六 实验室环境和人体表面微生物的检查 一 目的要求 1.证明实验室环境与体表存在微生物。 2.比较来自不同穿梭与不同条件下的微生物的数量和类型。 3观察不同类群微生物的菌落形态特征。 4.体会无菌操作的重要性。 二原理三 1.培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂平板 2. 无菌水，灭菌棉签（装在试管内），接种环、试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔，废物缸。 四 操作步骤 每组在“实验室”和“人体”两大部分中各选择一个内容作实验，或由教师指定分配，最后结果供全班讨论。 写标签 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。 培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察2个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。 实验室细菌检查 ⑴ 空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或吾人走动的其他实验室，移去皿盖。1h后盖上2个皿盖。 ⑵ 实验室和门的旋钮 用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线，如图Ⅱ—1。 取棉签 左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图Ⅱ—2，B），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻的倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心的取出（图Ⅱ—2，C）。放回棉塞（或试管帽）（图Ⅱ—2，D），并将空试管放在试管架上。 弄湿棉签 左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞（或试管帽）并烧灼管口，将棉塞插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以出去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞（或试管帽），并将灭菌水试管放在试管架上。 取样 将湿棉签在实验台上面或门旋纽上擦拭约2cm2的范围。 接种 按图 Ⅱ-3A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下（图Ⅱ-3B），立即闭合皿盖。并按图Ⅱ-2，E和F，将原放棉签的空试管拔出棉塞（或试管帽），烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。 划线 另取接种环在火焰上灭菌，入图Ⅱ-4，先将环端烧热（图Ⅱ-4A），然后将接种环提起垂直防在火焰上（图Ⅱ-4，B），以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，再移向环端，如此，如此很快地来回通过火焰次数（图Ⅱ-4，C）。也可用一种电加热灭菌器（图Ⅱ-5），将接种环（或针）伸进电热器中心内几秒钟，达到灭菌的目的。此方法简便，同时可以防止火焰灼烧时被烧物的溅出。 左手拿起平板，同样开启一缝，将灭过菌并已冷却的接种环（可在琼脂表面边缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示太烫），通过琼脂顶端的接种区，向下划线，直至平板的一半处（图Ⅱ-3，C）。 接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会划破琼脂。 闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷却。接种环通过前面划的线再在琼脂的另一半，按图Ⅱ-3，D从上向下来回划线至1/2处。 烧灼接种环，转动平板，按图Ⅱ-3，E，划最后1/4，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。 整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。 人体细菌的检查 ⑴ 手指（洗手前与洗手后） 分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后（当然，班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的）。 移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表面，轻轻的来回划线，盖上皿盖。 用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。 ⑵ 头发 在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿盖。 ⑶ 咳嗽 将去皿盖的琼脂平板放在离口约6~8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。 ⑷鼻腔 按照实验台检查法的步骤②和③，取出棉签，并将其弄湿。 用湿棉签在鼻腔内滚动数次。 按实验台检查法的步骤⑤和⑥，接种与划线，然后盖上皿盖。 将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放37℃培养箱，培养1~2d。 结果记录方法 ⑴ 菌落计数 在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板也一分为四，数1/4面积的菌落数。 ⑵ 根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量数量生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。 菌落特征描写方法如下： 大小，大、中 、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下