实验八培养基的配制及湿热灭菌.pptVIP

实 验 八 培养基的配制及湿热灭菌；玻璃器皿的干热灭菌 一、实验目的 明确培养基的配制原理；通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。 学习高压蒸汽灭菌的操作方法；学习干热灭菌的操作技术。 实验原理 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。 灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方法。 干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器 加压蒸汽灭菌法其步骤如下：1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2.接通电源，进行加热3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。4.当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为1210C，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。 紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。 化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。 三、实验材料 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、包装纸、防水纸、绳、棉花、标签等。 四、实验步骤 培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌 （一）、培养基的配制方法和步骤 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用 NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。 培养基的配制方法和步骤 （二）高压蒸汽灭菌 适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。加水——装料——加盖——排气——升压——保压——降压——无菌检查（三）干热灭菌法 适用于玻璃器皿，如试管、培养皿、三角瓶、移液管等的灭菌。装入待灭菌物品——升温——恒温——降温——取出灭菌物品（待烘箱内温度降到70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品） 五、实验结果 检查培养基灭菌是否彻底。 总结你所用过的3-5种消毒灭