实验五酵母菌个体、群体形态观察与血球板直接计数技术.pptVIP

实验五 酵母菌个体、群体形态观察与血球板直接计数技术 一、实验目的：1.观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式、子囊孢子；2.学习区别死活菌方法；3.学习使用血球计数板进行微生物计数。 二、实验原理 区别酵母菌死活菌的原理 血球计数板计数法： 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故称为总菌计数法。 三、实验材料： 酿酒酵母、血球计数板、显微镜、盖玻片、载波片、碱性美蓝染液、接种环、酒精灯 四、方法及步骤 1.酵母菌菌落观察（形态、大小；酵母菌形态观察与直接计数、表面、色泽等描述之） 2.个体形态：美蓝浸片观察描述、图示，两种酵母的形态、繁殖方式（芽殖子）、死活细胞鉴别假菌丝等。 1、血球计数： ⑴灭活：取菌悬液一管（10ml）摇匀，加入1%的甲醛，将酵母菌灭活，充分振荡，使菌体分散成单个菌。 ⑵稀释：将上述菌液适当稀释50倍或100倍，菌液如不浓可不必稀释，要求每小格内约3—5个菌体为宜。 ⑶染色：加0.1%的吕氏美蓝酒精溶液0.5ml，摇匀，使菌体着色。 ⑷取清洁干燥的血球计数器，在计数室上加盖盖玻片。 六、思考题 根据你的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差？力求准确？ * * 计数板是一块特制的厚载玻片，玻片上有四个槽构成三个平台，中间的平台又由一短的横槽隔成两半，其上各刻有一个小方格网。每个方格网共分9个大方格，只有中央的大方格供计数用称为计数室，其边长为1mm，共刻有400小方格，当加盖玻片于突起部分上面时，计数室即形成一个体积为0.1立方毫米（面积为1平方毫米，深度为0.1毫米）。 计数板的规格有两种，一种是25中方格×16小格=400小格，另一种是16中方格×25小格=400小格，但其总体积均为0.1立方毫米（见图）。 将要数的样品（酵母菌）做成悬液，加一滴在计数板上，盖上盖玻片，就可以根据显微镜下观察到的每小格内平均的酵母菌细胞数，计算出每ml培养液中酵母菌的总数。其计算公式如下： ⑴、16×25的计数板 酵母细胞数1ml=100小格内菌数/100×400×103×稀释倍数 ⑵25×16的计数板 酵母细胞数1ml=80小格内菌数/80×400×103×稀释倍数 ⑶五方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，1ml=1立方厘米=1000立方毫米。 总菌数=A/5×25×10×1000×B。 ⑸取已稀释到100倍（或50倍）的酵母菌悬液一管，用滴管滴一滴于盖玻片边缘，使菌液自行渗入（不能有气泡产生），多余的菌液用吸水纸吸干，置于显微镜下计数。 ⑹计数时，按计数板的对角线方法，数右上右下，左上左下，通常以记五个中格的菌值来代表计数室中的含菌量，即各角上的中格及中央的一个中格的酵母数（即80小格），每个样品计数需要重复两次，若数据相差太大，则要重复计数 ⑺计数完毕后，将计数器在水龙头下冲洗，绝不能用硬物洗刷，以防损坏计数室，洗完后自行凉干或用吹风机吹干，镜检观察每小格内是否有残留的菌体和其他沉积物，若不干净则必须重复洗涤至干净为止。 五 实验结果 1. 绘图说明各形态 将结果记录于下表中。A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。 ? A B 二室 菌数/mL ? ? 各中格中菌数 ? 1 2 3 4 5 ? ? 平均值 ? 第一室 ? ? ? ? ? ? ? 第二室 ? ? ? ? ? ? ? ? ?