第一章：显微镜基础知识.ppt

现代生物学实验技术 弭 忠 祥 Mi zhongxiang 电 话611510） Email：zhxmi@usx.edu.cn 课 程 简 介 现代生物学技术？ 主要是指生物学中的一些常用的实验技术。 现代生物技术？ 主要是指基因工程、细胞工程、蛋白质工程、酶工程和发酵工程。 课程主要内容 显微技术 电子显微镜技术 超速离心及分光光度技术 层析技术及电泳技术 课程安排 总学时32学时 理论课18学时 实验课14学时 第一章:显微镜基础知识 显微镜及其发展 电子显微镜 早期的光学显微镜 显微镜的分类 倒置显微镜 物镜与照明系统颠倒，物镜在载物台下方，用于观察培养的活细胞。 显微操作仪的作用：可用于细胞核移植 聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。 光线通过透明标本时，由于细胞各部分的折射率和厚度的不同，光波的相位会发生改变（产生相位差）。 环状光阑和相板，利用光的干涉现象，将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差（明暗差）。 石英玻璃制作的超高压汞灯作光源，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15min。能发射很强的紫外和蓝紫光，以激发各类荧光物质产生荧光。 用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像。 由于激光束的波长较短，光束细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，是普通光学显微镜的3倍。 用极细的尖针，头部为单个原子去接近样品表面，当针尖和样品表面靠得很近，即小于１纳米时，针尖头部的原子和样品表面原子的电子云发生重叠。此时针尖和样品之间产生隧道电流。通过控制针尖与样品表面间距的恒定，并使针尖沿表面进行精确的三维移动，就可将表面形貌和表面电子态等有关表面信息记录下来。 它主要用来描绘表面三维的原子结构图，在纳米尺度上研究物质的特性。 二、电子显微镜基本概念 电子束作为光源 电磁场作为透镜 比光镜有更高的 分辨率与放大倍数。 电子束 高速运动的电子，是电镜的光源。 其特点是： 粒子性与波动性 受磁场力的作用 打到荧光物体上可产生可见的光 波长与加速电压的平方根成反比 电磁场（电子透镜） 分辨率（δ） 能够区分出相邻两点或两条线之间最小距离的标志。 放大倍数（k） K=人眼睛δ/显微镜δ 眼睛δ = 0.2 mm 光镜δ = 0.2μm 光镜 k = 0.2 mm/ 0.2μm = 1000倍 光学显微镜的分辨率 δ = 0.61λ/n.sinα λ是波长：绿光500 nm=0.5 μm n 是介质折射率:空气1.0 水1.3 香柏油1.5 Sinα是孔径角。 δ = 0.2μm 电子显微镜的分辨率 δ = 0.2nm = 2埃（A） K=人眼睛δ/显微镜δ 0.2mm/0.2nm = 1,000,000 x ? 扫描隧道显微镜(Scanning Tunneling Microscopy) 镶嵌了48个Fe原子的Cu表面 原子图像 螺线管线圈 包壳透镜 极靴透镜 磁场强度 强 0.2 mm Airy Disc 的半径等于光镜的分辨率 0.2μm * 一、显微镜的发展 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 图1-1 Robert Hook和他的显微镜 1665年英国Robert Hook和他的显微镜 现代的光学显微镜 生物显微镜 实体显微镜 倒置显微镜 显微操作仪 1 切开卵母细胞透明带 2 挤出卵母细胞细胞核 3 注入供体细胞核 4 电融合仪融合 细胞核 去核卵母细胞 核移植重构胚 暗视野显微镜 ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????????????????????????????? 相 差 显 微 镜 这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。 相差显微镜原理 荧 光 显 微 镜 荧 光 显