实验二显微镜的使用酵母菌的观察细菌的单染色及简单染色重点剖析.ppt

细菌的单染色及革兰氏染色 （一）简单染色法 目的要求 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法； 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。 基本原理 借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。 实验器材 菌种 土壤样品分离纯化后得到的细菌 染色剂 草酸铵结晶紫染液 番红染液 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。 实验结果 根据观察结果，绘出细菌形态图。 思考题（P76五、2. （１）（2）（3）） 在进行细菌涂片时应注意哪些环节？ 细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？ 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？ （二）革兰氏染色法 目的要求 学习并初步掌握革兰氏染色法； 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 实验器材 菌种 枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物 土壤样品分离纯化后得到的细菌 染色剂 草酸铵结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%乙醇 番红染色液 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。 实验结果 列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色反应。 思考题 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？ 你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？ 实验二 （一）显微镜的构造、性能和使用方法 一、目的要求 了解普通光学显微镜(复式显微镜)的构造、基本原理、维护和保养的方法 学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法 二、光学显微镜的基本结构 机械和支架系统 照明系统 光学放大系统 三、油镜的工作原理 增加照明亮度 增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率：显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。 D=λ/2NA=λ/2n·sin(α/2 ) D：分辨率 NA：物镜的数值孔径值 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率 ?：镜口角（即入射角） 四、显微镜的使用方法 观察前的准备 显微镜的安置 光源调节 根据个人情况，调节双筒显微镜的目镜 右眼看清 调节左目镜的视度调节圈 扳动镜管，调节至瞳孔间距 显微观察 低倍镜观察 高倍镜观察（同焦现象） 油镜观察 在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将载物台缓慢上升，使油镜浸在镜油中。 显微镜用毕后的处理 下降载物台，取下载玻片； 用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量酒精乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的洗液； 用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件； 将镜体各部分复原。 五、思考题 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加香柏油有何作用？ 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 影响显微镜分辨率的因素有哪些？ ——P47五、2.（１）（3）（4） （二）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 目的要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 基本原理 美蓝是一种无毒性染料.氧化型呈现蓝色,还原型呈现无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色,代谢活力强的细胞具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型.因此,具有还原能力的酵母活细胞为无色,死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色. 实验器材 菌种 啤酒酵母 溶液或试剂 0.1%吕氏碱性美蓝染色液 仪器或其他用具 显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。 实验步骤 制片 在载玻片中央加一滴0.1%美蓝→取菌少许→混匀→盖上盖玻片→静置3min、0.5h 观察 用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖 根据颜色鉴别死活细胞 活细胞：无色；死细胞：蓝色 实验结果 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽生殖方式。 记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响P75表Ⅳ-1。 思考题 吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。 调节手动光轮 调节孔径光阑手柄 聚光器的升降 镜头复原、手动光轮调到最低档 操 作 步 骤 涂 片 干 燥 固 定 染 色 镜 检 水 洗 干 燥 操 作 步 骤 采用三区涂片法制片 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌与枯草芽孢杆菌 混合涂片 操 作 步 骤 大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂片油镜下形态（革兰氏染色） 大肠杆菌 萌发芽孢的