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第三章 生物制品的菌种与毒种 主要内容： 一、菌种、毒种的概念与分类 二、菌种、毒种的一般要求 三、菌种、毒种的选育 一、生物制品菌种和毒种的概念与分类 (一)概念 凡应用于生物制品(疫苗、免疫血清及诊断制剂等)生产、检定和研究的细菌、病毒的原种，以及分类地位上在原虫以下的生物种均属生物制品的菌种与毒种范围。其中主要指生物制品生产，检定用的菌种与毒种。有人建议,将制苗用的细胞株(二倍体细胞株、传代细胞系等)纳入菌种与毒种的管理范围。 菌（毒）种是国家的重要生物资源，现在世界各国对这项资源都极为重视，并设置各种专业性的保藏机构，现在不少国家的菌种与毒种中心都用电子计算机进行管理，在欧洲甚至准备对国家间的菌种中心用电子计算机联网。 (二)菌、毒种的分类 生物制品用的菌种和毒种，按其在生物制品生产、检定过程中用途的不同，可分为四类： 1.生产用的菌种和毒种 2.工具菌种和毒种 3.检定用的菌种和毒种 4.标准菌株/毒株以及参考菌株/毒株 ① 直接生产用的菌和毒种 ② 免疫用的菌和毒种 ③ 加工用的菌和毒种 二、生物制品菌种和毒种的一般要求 菌种和毒种是生物制品质量的关键因素之一。制备疫苗、免疫血清必须安全、有效；诊断制剂必须特异而敏感。 (一)来源(历史)清楚，资料完整 由专门机关保管、分发的生物制品用菌种和毒种，对其来源、分离和传代的历史、生物学特性以及免疫学特性、安全与效力检定等资料，有关审批单位的鉴定，结论及审核批示材料均应清楚。 《兽医生物制品制造规程》规定，凡经农业部发给批准文号的产品，生产所需的菌种和毒种，由中监所或中监所委托分管的单位负责供应。 我国兽医生物制品菌种和毒种管理3种情况：①中国兽药监察所（中监所）鉴定和保管；②委托有关单位代管，如委托哈尔滨兽医研究所管理的猪丹毒GC42菌苗株、黑龙江省生物制品一厂代管的禽霍乱G190E140菌苗株等；③各地菌种，由中监所统一鉴定，如大肠杆菌。 (二)生物学特性比较典型 生物学特性包括菌种和毒的形态特征、培养特性(菌落特征、蚀斑特征)：对动物的病原性特点及引起细胞病变的特征；生物化学、免疫学及血清学特性等等，均应符合标准。 制造灭活苗的菌种和毒株，应该是标准强毒或者弱毒，以免疫原性优良为基本条件，必须经过严格的审查与鉴定，要求一切性状必须典型。如《规程》规定，制造猪丹毒灭活苗，必须选择典型光滑型、圆形、露珠状的小菌落。制造弱毒苗的毒种与菌种，毒力必须稳定，形态特征典型，不易变异，特别应注意其与强毒株生物学性状区别的要点。 生物制品主要是用于预防、治疗和诊断畜禽等传染性疾病的免疫制剂，因此要求生物制品生产用的菌种和毒种必须具有良好的抗原性和免疫原性。 对制备活疫苗的菌种和毒种，必须严格筛选、严格检验。特别应注意其安全性，包括菌种和毒种本身及外源性污染两个方面。 (三)血清型相符 在菌种和毒种选择与鉴定时，需特别注意菌种和毒种特性与血清型与疫苗使用地区流行的病原相符。 (四)遗传性状稳定 菌种和毒种在保存、传代和使用过程中，受各种因素影响而变异，因此保证其遗传性状稳定是保证生物制品质量的重要因素之一。 微生物种是以群体形式存在，遗传学纯一性和相对稳定性是指群体变异幅度必须有严格的限制。为保持种的纯一和相对稳定，生产生物制品的菌、毒种应通过定期传代、筛选、检定等工作进行控制。 生产用的病毒毒种是否具有同质性，直接关系到生物制品的质量。我国用于生产畜禽用活疫苗的病毒毒种，一类是我国自行分离培育的弱毒株；另一类是从国外引进的。二者大部分都未进行过纯化和标准化，均属于群体(多克隆)病毒，病毒粒子的大小与构造、增殖速度、蚀斑形成能力。 三、菌种和毒种选育 (一)强毒力菌种和毒种选育 强毒菌种和毒种广泛用于诊断制品、抗病血清、灭活疫苗和疫苗制品的效力检验。用作人工培育弱毒的原始毒种，并用于微生物学、免疫学及传染病学等研究。 强毒菌种和毒种常来自疾病流行地区的典型患病动物体内分离。在疾病流行初期，从临床症状和病理变化典型而又未经任何治疗的患病动物体分离到毒力强和抗原性良好的自然强菌株和毒株，如我国的石门系猪瘟病毒和多杀性巴氏杆菌C44-1等。然后，用从各地分离的自然强菌株和毒株中筛选出符合标准的菌株和毒株，供生物制品的制造和检验。 病毒或细菌分离 鸡胚 冻干、冷冻或冷藏保存 筛选出毒力强，生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗用抗体活用于疫苗效力检验等 稳定性试验 抗原性试验 致病力试验 纯粹性试验 原动物 抗原性 细胞 LD50 ELD50 免疫原性 实验 动物 EID50