DNA重组技术的基本工具讲述.ppt

人造血液及其生产 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 白细胞介素、溶血栓剂、凝血因子、人造血液代用品 疫苗： 乙肝、狂犬病、百日咳、霍乱、伤寒、疟疾 基因工程药品 基因诊断： 也称为DNA诊断或基因探针技术，即在DNA水平分析检测某一基因，从而对特定的疾病进行诊断。 基因治疗曙光初照 是指是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。 基因治疗： 基因工程与环境保护 环境监测：　　 检测环境中的病毒、细菌等污染。 用DNA探针可以检测饮用水中病毒的含量。 1t水中有10个病毒也能被检测出来 快速灵敏 　利用基因工程培育的“指示生物”能十分灵敏地反映环境污染的情况，却不易因环境污染而大量死亡，甚至还可以吸收和转化污染物。 环境污染治理 1）用基因工程产物——“超级细菌”分解石油，可以大大提高细菌分解石油的效率。 3）通过基因重组构建新的杀虫剂，取代生产过程中耗能多、易造成环境污染的农药，并试图通过基因工程回收和利用工业废物。 2）用基因工程培养出“吞噬”汞和降解土壤中DDT的细菌，以及能够净化镉污染的植物。 基因工程与食品业 基因工程为人类开辟新的食物来源。 1）鸡蛋白基因在大肠杆菌和酵母菌中表达获得成功。这表明，未来能用发酵罐培养的大肠杆菌或酵母菌来生产人类所需要的卵清蛋白。 2）用基因工程的方法从微生物中获得人们所需要的糖类、脂肪和维生素等产品。 基因工程为食品工业中提供了什么前景？ 当人类拥有了只有大自然才拥有的改造生物、创造生物的能力时，我们是否感到很坦然呢？ 转基因食品 安全吗?! 目前，大多数专家认为，已经投入商品化生产的转基因番茄、玉米等农产品都是安全的。迄今为止尚无食用转基因生物产品引起任何严重问题的科学报道。 1、质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是 ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居” A．①③⑤⑦ B．①④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦ 人们常选用的细菌质粒分子往往带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因的主要作用是 A . 提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B. 有利于对目的基因是否导入进行检测 C. 增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接 目的基因的提取方法 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法 鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (直接分离法) 1、直接分离基因 “鸟枪法” 又称“散弹射击法”.这种方法犹如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来.具体做法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫扩增）,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来. 用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便,缺点是工作量大,具有一定的盲目性? 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 目的基因的mRNA 单链DNA(cDNA) 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 2.人工合成基因法 2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 （P11表）： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 优点 缺点 鸟枪法 反转录法 根据已知氨基酸合成DNA法 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 思考:为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗? 哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？ 1）DNA序列自动测序仪： 2）PCR技术： 对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。 使