动物细胞工程的主要技术详解.ppt

* 贵州省德江县第二中学生物备课组 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 动物体细胞克隆 1.动物细胞培养的概念？ 3.动物细胞培养的基本流程？ 4.为什么选用胰蛋白酶做上述处理？ 5.如何界定原代培养和传代培养？ 6.动物细胞培养的条件？ 阅读课本P53-P54 2.为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 一、动物细胞培养 1.概念 2.原理 3.结果 细胞增殖 获得克隆细胞，即细胞株或细胞系，而不是得到动物个体。 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养液中,让这些细胞生长和增殖。 二、动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬浮液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变）。 为什么用胰蛋白酶处理？ 分瓶传代培养 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制。 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 细胞株：遗传物质未改变 细胞系：遗传物质已改变 原代培养 三、动物细胞培养的条件 1.无菌无毒的环境 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。适宜的酸碱度：pH：7.2-7.4。 4.气体环境 2.营养 3.温度和pH 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入动物血清。 95％空气+5％CO2的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的pH。 1.生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 四、动物细胞培养的应用 2.培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植。 3.用于检测有毒物质。 4.用于生理、病理、药理等方面的研究。 动物细胞培养 植物组织培养 植物细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 培养结果 培养目的 培养基特有成分 培养基性质 原 理 比较项目 3.为什么用胰蛋白酶处理？ 1.为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 2.为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 扩大细胞与培养液的接触面积，利于细胞吸收营养。 4.为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适pH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜pH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜pH为2，胃蛋白酶在pH为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 1.在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（　　 ） A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞 A 2.动物细胞工程技术的基础是（　　 ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　 C.胚胎移植 D.动物细胞培养 D 3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于（　　 ） A.培养基不同 B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株 A 4.一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（　　 ） ①无毒的环境 ②无菌的环境 ③培养基需要加入血清 ④温度与动物体温相似 ⑤需要O2，不需要CO2 ⑥CO2能调节培养液pH A.①②③④⑤⑥ B.①②③④ C.①③④⑤⑥ D.①②③④⑥ D 5.动物细胞培养的特点（　　 ） ①细胞贴壁 ②有丝分裂 ③细胞分化 ④接触抑制 ⑤减数分裂 ⑥原代培养一般传1－10代 A.①②④⑥ B.②③④⑤ C.①③④⑥ D.③④⑤⑥ A （1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自 。 （2）容器A中的动物器官或组