实验七兔肾原代细胞的分离与培养要点解析.pptVIP

兔肾原代细胞的分离与培养 岳续朋 2013-12-27 如何获得体外培养的细胞 肺癌A549 结肠癌colo320 人肾上皮细胞293T 肝癌HepG2 原代培养 是从供体取得细胞、组织或器官后在体外进行首次培养直至成功地进行首次传代之前的培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞。 材料与方法 实验动物 出生3天的家兔（SPF级），雌雄不限 仪 器 超净工作台、恒温培养箱、倒置显微镜、水浴槽、离心机、酒精灯、解剖剪、眼科剪、镊子（尖头、平头和有钩镊）、不锈钢滤网（100目、200目）烧杯、培养皿、培养瓶、离心管、吸管。 试剂 75%乙醇 PBS缓冲液（pH7.2） D-HanKs液（无钙镁离子） 消化液（0.5%胰蛋白酶、0.02%EDTA1:1混合） 0.4%台酚蓝 RPMI-1640培养基(酚红指示剂) 原代培养方法流程图 组织块培养法 消化培养法 处死 取材 接种 培养 剪切清洗 消化 计数 培养 处死 取材 剪切清洗 组织块培养法 动物处死 取新生的家兔（出生2-3天）一只，用颈椎脱臼将其处死，浸入盛有75%乙醇的烧杯中5-10秒钟，然后取出放在解剖平皿中送入超净工作台。 取材 用碘酒和7