单细胞测序技术教程.pptxVIP

单细胞测序技术; 过去二十几年里，随着基因测序技术水平的提高以及千人基因组计划、癌症基因组计划等重大国际合作项目的相继开展，基因组研究日渐被推向高潮。 我们能够得到全基因组序列信息，但是对其进行研究得到的结果只是一群细胞中信号的平均值，或者只代表其中占优势数量的细胞信息，单个细胞独有的特性被忽视。另外有些样品稀少无法在实验室培养，样品量不足以进行全基因组分析，因此全基因组测序遇到难题。 ; 单细胞测序主要涉及单细胞基因组测序和转录组测序两方面，分别针对单个细胞的DNA和RNA进行序列分析和比较，进而揭示基因组和转录组的变化。; 优势： 1.测量基因表达水平更加精确； 2.能检测到微量的基因表达子或罕见非编码RNA 需要克服的难题： 1.如何实现均匀扩增； 2.全基因组覆盖问题； 3.较高的扩??效率。 ; MALBAC技术，首先需要进行5轮MDA预扩增，然后就可以使新获得的扩增产物形成闭合的环状分子。由于这些环状分子不能够被进一步扩增，所以整个扩增过程就变成了线性扩增。然后再进行常规的PCR扩增，由于此时采用的模板更加均一，所以在进行PCR扩增时就不易造成较大的差异。;基因组模板DNA;;;;;;第二个要解决的难题，这里是利用Phi29聚合酶能一次在模板上聚合出多个新链的功能来达到这个目的。在5轮的扩增之后，每个模板都会有5*n2个扩增片段，这样就可以保证建库时大多数的基因组区域可以被建成文库，最后可以被测序测到。 ;MDA方法的技术核心是用Phi29DNA聚合酶来进行直接的扩增，Phi29DNA聚合酶可以把双链DNA进行解链，然后在常温条件下就把原始模板进行大量扩增;MDA的特点： 扩增效率更高，实验方法简单 MALBAC的特点： 扩增均一性更好； 得到的扩增DNA的量相对较少，或者说他的扩增效率相对较低;应用;在有习惯性流产的夫妇当中，最常见的病因就是染色体的平衡易位，所谓染色体平衡易位也就是A染色体的一段移到了B染色体上;请大家批评指正！ 谢谢！