感染性疾病及免疫学检测概要.ppt

常见病毒性传染病及其免疫学检测 免疫学检验主要用于： 常用的免疫学检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 金标法（试纸条、试纸板） 化学发光法 1.电化学发光（罗氏） 2.微粒子化学发光（雅培） 免疫印迹法 (Western blotting)? 凝集反应（梅毒检测) 酶联免疫吸附试验ELISA （enzyme linked immunosorbent assay） 是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。 常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP）。 基本步骤 包被 封闭 孵育 洗涤 显色 结果测定 缺点：1只是诊断的辅助手段，特异性和灵敏性有待提高。2操作过程有些繁琐，反应时间过长，不能一蹴而就。 金标法 原理：金标层析法采用双抗原夹心法免疫测定原理，选择经纯化的基因工程制备的抗原，分别作为包被抗原和胶体金结合抗原。由于层析作用反应复合物沿硝酸纤维膜向前移动，当遇到包被抗原时，形成红色沉淀线。在包被膜上还有一条质控线对照，故当有两条红线时判为阳性，只有一条红线时，判为阴性。 免疫印迹法 免疫印迹法 (Western blotting) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。（病毒学检测主要用于检测HIV抗原确证试验） 化学发光免疫分析chemiluminescence immunoassay（ CLIA） CLIA是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。 这种方法兼有发光分析的高灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性。 CLIA优越性 高度敏感，可达pg／ml或pmol水平； 特异性强，重复性好，CV＜5％。 测定范围宽，可达7个数量级。 试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长，达数月甚至数年。 操作简单，耗时短，易于自动化。 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。 常见术前检测 甲型肝炎抗体（抗HAV IgM） 乙肝五项 丙型肝炎抗体 （抗HCV) 梅毒螺旋体抗体 人类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV） 病毒性肝炎 HAV HBV (hepatitis B virus）乙型肝炎病毒 我国流行现状 HBV颗粒 HBV特点 HCV （hepatitis C virus）丙型肝炎病毒 HCV特点 HIV (Human Immunodeficiency Virus)人获得性免疫缺陷病毒 HIV的结构特点 HIV的检测 结果判断 梅 毒 syphilis Thank you!! 呈世界性分布 极易慢性化，与肝硬化、原发性肝癌 关系密切 有包膜的单股正链RNA病毒 抗HCV抗体非保护性抗体 输血和非肠道途径传播 主要检测IgG 丙型病毒性肝炎(HCV)临床意义 HCV是输血后肝炎和散发性非甲非乙型肝炎的主要病原。HCV感染后可导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌等多种肝脏疾病。抗HCV阳性而血清中没有HCV RNA提示既往感染。 检测方法 常用检测方法为ELISA法，金标记免疫层析法和化学发光法。 检测方法： ELISA 化学发光 我国历年艾滋病病毒感染者和病人数 HIV-1和HIV-2 逆转录病毒 两股相同的正链RNA CD4 抗原 辅助受体 CD4+ 细胞 HIV gp120 结合CD4 / 辅助受体 病毒经黏膜或皮肤破损进入体内 感染黏膜或皮肤层树突状细胞 病毒于24小时内在树突状细胞繁殖 病毒于24-28小时到达局部淋巴结 病毒于5天内出现在外周血液中 每个感染细胞可产生5000个病毒颗粒，每人每天可产1010病毒。 筛选试验：敏感性高，如ELISA，胶体金标记层析法。 确诊试验：特异性高，如蛋白印迹试验和IFA 抗体最早在感染后二周，最晚三个月会转为阳性 初筛试验2次阳性，再进行确认试验 样品 初筛检测 阳性反应 阴性反应 筛查试剂 复查 原有试剂加另一种筛选试剂 均阳性反应 一阴一阳 均阴性反应 送确认实验室确认 报告阴性 确诊试验阳性，有临床症状，诊断为AIDS 确诊试验阳性，无临床症状，诊断为HIV感染者 确诊试验阴性，但初筛试验阳性或有临床症状， 3个月后复查 是梅毒螺旋体引起的一种慢性传染病，本病的特点是病程的长期性和潜匿性，病原体可侵犯任何器官，临床表现出各种不同的症状。 三个阶段 一期梅毒：硬性下疳； 二期梅毒：梅毒疹； 三期梅毒：累及心、肝、神经系统、骨等。 后天性梅毒（获得性）： 95%性交