讲稿-12食用菌栽培实验指导.docVIP

实验一 母种培养基配制（4学时） 一、实验目的 掌握固化培养基的配制，学会棉塞的制作方法。分析有天然原料与无天然原料培养基在配制过程中的不同。 二、基本技能训练内容 制备马铃薯滤液；融化琼脂；培养基的分装；棉塞的制作。 三、主要仪器设备与材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布、电炉、菜刀、菜板、小铝锅等；马铃薯、葡萄糖或蔗糖、麸皮、琼脂、水。 四、实验方法 1、配方（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15~20g，自来水1000ml，pH自然。 2、制作方法 1）制滤液：马铃薯去皮和芽眼，切成0.5mm粗的长条，称取200g放入锅中，加水1000ml，将其煮沸后再文火煮20min。用双层纱布过滤，滤液用水定容至1000ml。 2）化琼脂：将滤液加热至即将沸腾时加入琼脂，不断搅拌（控制火力不要使培养基溢出或烧焦）。琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水不足水量）。 3）分装：通过漏斗装置，趁热将培养基分装于试管中，装量约占试管高度的1/4（分装三角瓶以不超过其容积的一半为宜）。管口或瓶口不要沾染培养基。 4）制棉塞：棉花以白色长绒的不脱脂棉花为宜。根据试管口大小取棉花，将其卷成棉塞，最好外包一层纱布。将棉塞塞入试管口。棉塞长度约6~7cm，塞入试管2/3。要求外表光滑，外包的纱布无皱折，松紧适宜等。 5）包扎：管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 五、实验报告要求 完成实验报告、详细记录培养基配制过程，并回答分装的技术要求有哪些？ 实验二 母种的转管与组织分离（2学时） 一、实验目的 清楚无菌操作要点，熟练操作母种转管、组织分离技术。能正确分析自己的接种结果。 二、基本技能训练内容 接种环境的处理；母种的转管；组织分离。 三、主要仪器设备与材料 超净工作台、酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉球、大镊子、75%酒精、标签纸等；空白斜面培养基、平菇母种、平菇子实体等。 四、实验方法 1、接种环境的处理 超净工作台的消毒，用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20min后使用。 2、母种的转管 1）手及菌种管的消毒 用肥皂洗手，再用75%酒精棉球擦手和菌种管表面，在酒精灯焰上略烧试管外的棉塞后，立即将菌种管放入超净工作台内。 2）转管 酒精棉球擦拭接种环。左手持菌种管和斜面管，两支试管口对齐于火焰上方。右手持接种环，并将其在灯焰上干热灭菌，用小指及无名指拔掉棉塞，使棉塞底部朝外。接种环冷却后伸入菌种管内取略豆粒大带有培养基的菌种块，迅速移人斜面培养基的中部，菌丝朝上。然后，将棉塞在火焰上烧一下，立即塞入试管口，旋紧棉塞。 接种环不要触碰管口及管壁。接种后的试管应立即贴标签，注明菌种名称及接种日期，再进行适温培养。 3、组织分离法 此法是生产中最常用的方法，具有操作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种在培养基条件适宜的情况下，能保持原菌种的优良性状。 1）种菇消毒 在接种箱内，用镊子夹着燃烧的酒精棉球迅速擦拭菇体。 2）取接组织将菇体撕开，用无菌尖头镊在柄盖交界处取绿豆粒大组织，放入斜面培养基上。迅速塞上棉塞。 4、母种的培养 将斜面朝下斜置叠放于瓷盘中，放于培养箱中适温培养。2~3天后每天都要检查菌丝生长情况。及时挑拣污染试管（出现粘膜或杂色）。 5、注意事项 1）分离的母种一定纯化后再做出菇试验。 2）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产使用。 3）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7~10天）终止培养。分别用于菌种保藏或繁衍原种。 五、实验报告要求 完成实验报告，详细记录转管接种和组织分离过程，分析接种成败的原因。 实验三 原种、栽培种的培养基制备（4学时） 一、实验目的 能制作适宜培养料，独立完成接种前的准备工作。 二、基本技能训练内容 培养料的配制；菌种瓶及菌种袋的分装。 三、主要仪器设备与材料 高压灭菌锅、菌种瓶、棉塞、打孔棒、菌种袋；材料 木屑、麸皮、蔗糖、石灰粉、过磷酸钙、母种、原种等。 四、实验方法 1、配方与培养料配制 1）颗粒培养基（麦粒、玉米粒等） 配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%。 配制：将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸15~20min（熟而不烂，勿破皮），捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。 2）棉籽壳麦麸培养基 配方：木屑87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1