5.1 DNA的粗提取与鉴定解说.ppt

目的要求 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 实验思路 1、DNA可从哪些材料中提取？ 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ 基础知识 提取生物大分子的基本思路：选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 （二）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 实验设计 （一）实验材料的选取 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（ ） A .防止凝血 B. 加快DNA析出 C .加快DNA溶解 D.加速凝血 2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（ ） A 2mol/l B 0.1mol/l C 0.14mol/l D 0.015mol/l 3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ） A 加快DNA溶解的速度 B 加快溶解杂质的速度 C 减小DNA的溶解度，加快DNA析出 D减小杂质的溶解度，加快杂质的析出 * DNA的粗提取与鉴定 （一）DNA的溶解性 1.在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 2.如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液溶解或析出？ DNA在NaCl溶液中的溶解度 DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl的浓度的变化而改变。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 （三）DNA的鉴定 DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 蛋白酶能水解蛋白质，对DNA无影响。 大多蛋白质不能忍受高温，DNA在80度以上才会变性 洗涤剂可瓦解细胞膜，对DNA无影响。 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应以DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？ 哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。 鸡血、猕猴桃。 ②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长 鸡血细胞做实验材料的原因 ①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 准备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液（抗凝剂）注入新鲜的鸡血，用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的血浆，就可以得到鸡血细胞。 向制备好的鸡血细胞液中加入蒸馏水，同时用玻璃棒充分搅拌，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗过滤。取其滤液。 2、破碎细胞，获取滤液 为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？ 外界溶液浓度小于细胞内浓度，细胞会吸水以至胀破 用玻璃棒搅拌有什么意义？ 用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA 滤去的是什么物质？得到的是什么？ 滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 （三）去除滤液中的杂质 1、溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为 2 mol/L氯化钠溶液加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态 方案一 讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地沿一个方向搅拌，这时烧杯中有白色丝状物出现。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度接近于0.14 mol／L） 2、析出含DNA的粘稠物 3、滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤2中的溶液至 烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱