酶以及酶促反应总结.ppt

荧光素酶报告基因检测 是以荧光素 luciferin 为底物来检测萤火虫荧光素酶 firefly luciferase 。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光 bioluminescence 。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪 luminometer 或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。 通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。 酶联吸附免疫法 ELISA 原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。 辣根过氧化物酶在Western Blot检测蛋白中的应用 原理：利用特异的第一抗体与目标蛋白结合，再用辣根过氧化物酶标记的第二抗体与第一抗体相结合，加以底物显色来反映检测蛋白的强度。 2．酶标记测定法 酶可以代替同位素与某些物质相结合，从而使该物质被酶所标记。