第三章酶反应动力学和第四章固定化酶1-4分析.pptVIP

第三章 酶催化反应动力学（2学时） 主要内容： 酶催化反应动力学研究包括哪些内容 ? 1酶催化反应速率与酶活力的测定 酶活力是指酶催化某一化学反应的能力，其大小可以用在一定条件下该酶所催化的某一化学反应的反应速度（reaction velocity）来表示，酶活力的高低和化学反应的反应速度的大小两者呈线性关系。 1.1酶催化反应速率随时间的变化 酶催化的反应速度可用在单位时间内底物的减少量或者产物的增加量来表示。如图3-1所示的曲线图。 酶促反应速度随反应时间延长而降低。 引起酶促反应速度随反应时间延长而降低的原因？ （1）底物浓度的降低、产物浓度增加从而加速了逆反应的进行； （2）产物对酶的抑制作用； （3）随着反应时间的延长引起酶的部分失活等。 1.2 酶活力的测定原理 酶蛋白的含量很低，很难直接测定其蛋白质的含量，且常与其他各种蛋白质混合存在，将其提纯耗时费力。故不能直接用重量或体积等指标来衡量。 1.3酶活力测定时需注意： （1）选择反应的最适温度，根据不同的底物和缓冲液选择反应的最适pH。 （2） 速度要快，取反应的初速度 （3） 底物浓度要足够大（一般在10Km以上） 使酶被底物饱和，以充分反映待测酶的活力 2 底物浓度对酶促反应速度的影响 2.1中间络合物学说 中间络合物学说最早是由Henri和Wurtz两位科学家提出的。 在1903年，Henri在用蔗糖酶水解蔗糖实验研究化学反应中底物浓度与反应速度的关系时发现，当酶浓度不变时，可以测出一系列不同底物浓度下的化学反应速度，以该反应速度对底物浓度作图，可得到如图3-2所示的曲线。 酶底物中间络合物学说 根据这一实验结果，Henri和Wurtz提出了酶促化学反应的酶底物中间络合物学说。该学说认为：当酶催化某一化学反应时，酶(E)首先需要和底物(S)结合生成酶底物中间络合物即中间复合物(ES)，然后再生成产物(P)，同时释放出酶。该学说可以用下面的化学反应方程式来表示： 酶底物中间络合物学说 2.2 酶促反应的动力学方程式（米氏方程） 1913年Michaelis和Menten两位科学家在前人工作的基础上，根据酶促反应的中间络合物学说，推导出一个数学方程式，用来表示底物浓度与酶反应速度之间的量化关系，通常把这个数学方程式称为米氏方程： 米氏常数Km的含义 Km值就代表着反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度， 单位是mol/L。 。 米氏常数的应用价值 Km是酶的一个特征性常数：也就是说Km的大小只与酶本身的性质有关，而与酶浓度无关。 Km值还可以用于判断酶的专一性和天然底物，Km值最小的底物往往被称为该酶的最适底物或天然底物。 Km可以作为酶和底物结合紧密程度的—个度量指标，用来表示酶与底物结合的亲和力大小。 已知某个酶的Km值，就可以计算出在某一底物浓度条件下，其反应速度相当于Vmax的百分比。 Km值还可以帮助我们推断具体条件下某一代谢反应的方向和途径，只有Km值小的酶促反应才会在竞争中占优势。 米氏方程的双倒数作图 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 3 酶浓度对反应速度的影响 当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速度与酶浓度成正比 关系式为： V = K3[E] 4 抑制剂对酶促反应速度的影响 酶的抑制剂(inhibitor)：凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称为酶的抑制剂。 研究抑制剂的意义 （1）是研究酶的结构与功能、酶的催化机制以及阐明机体代谢途径的基本手段。 （2）可以为医药产业中设计新药物和农业生产中设计新农药提供重要的理论依据。 （3）在食品生产和保鲜中控制酶的催化效率。 4.1抑制作用的类型及鉴别 根据抑制剂与酶的作用方式的区别以及抑制作用是否可逆，我们可以将抑制作用分为两大类，即： 不可逆的抑制作用(irreversible inhibition) 可逆的抑制作用(reversible inhibition) 鉴别 4.2 不可逆的抑制作用 根据不可逆抑制剂选择性的差异，通常把不可逆抑制剂分为两种类型，即非专一性不可逆抑制剂和专一性不可逆抑制剂。 ①非专一性不可逆抑制剂 举例1：有机磷化合物对羟基酶的抑制 　 ②专一性不可逆抑制剂 a) Ks型不可逆抑制剂：具有与底物相类似的结构 例如：对甲苯磺酰-L-赖氨酰氯甲酮（TLCK）和胰蛋白酶的底物对甲苯硫磺-L-赖氨酰甲酯（TLME）具有相似化学结构 b) Kat型不可逆抑制剂：不但具有与天然底物相类似的结构，而且抑制剂本身也是酶的底物，专一性极高，因此也被称为自杀性底物。 例如：β-卤代-D-Ala是丙氨酸消