色谱分析概述资料.ppt

②凝胶色谱法的固定相 软质凝胶、半硬质凝胶和硬质凝胶三种。 ③凝胶色谱法的应用特点 ★保留时间是分子尺寸的函数，适宜于分离相对分子质量大的化合物，相对分子质量在400～8×105的任何类型的化合物 ★保留时间短，色谱峰窄，容易检测 ★固定相与溶质分子间的作用力极弱，趁于零，柱的寿命长 ★不能分辨分子大小相近的化合物，分子量相差需在10%以上时才能得到分离 （三）高效液相色谱分离的选择 1.高效液相色谱法的运用范围 ★气相色谱法适用于分析相对分子质量较小，容易挥发成气体的物质。 ★气相色谱法控制温度可达300℃，热稳定性差的物质在此温度下将发生分解，但高沸点物质在此温度下也不能完全气化 ★高沸点、热稳定性差的有机化合物、以及相对分子质量大 大于400 的有机物 约占有机物总数的70%~80% ，均不宜应用气相色谱法进行分析，但可以应用高效液相色谱法进行分析。 ★高效液相色谱法在常温下进行分离与分析，不会导致被测物质的热分解，其流动相是液体，所以只要试样能制备成溶液，原则上都可以用高效液相色谱法分离与分析，如离子型化合物、不稳定天然产物以及氨基酸、蛋白质等高分子化合物均可用高效液相色谱法获得较好的分离效果。 2.高效液相色谱分离方法的选择 ①选择的基本依据 相对分子质量的大小： ★对于相对分子质量在200以下、易挥发、热稳定性好的化合物，可采用气相色谱法； ★★相对分子质量在200～2000的化合物，可用液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法 ★★★相对分子质量大于2000的试样，适宜用凝胶色谱法进行分离 试样的溶解性 ★能迅速溶于水的样品，可采用反相液-液色谱法； ★★若试样全部或大部分能溶于HCl或NaOH溶液，表示试样属于离子型化合物，可采用离子交换色谱法来分离； ★★★溶于非水溶性溶剂 如己烷、异辛烷、苯、甲苯等烃类 的试样，可选用液-固吸附色谱法3溶于二氯甲烷或三氮申烷的试祥，选用常规的液-液色谱 正相色谱 法和吸附色谱法； ★★★★溶于甲醇等溶剂的试样，则可以用反相液-液色谱法进行分离与分析。 ①各类物质常用的分离方法 ★内标法 当只需测定试样中某几个组分，或试样中所有组分不可能全部出峰时，可采用内标法。 内标法是将一定质量的纯物质 非被测组分的纯物质 作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据被测物质和内标物的质量及其在色谱图上相应峰面积之比，求出被测组分的质量分数。 设样品的质量为m，则待测组分i的质量分数为 选择内标物应遵循的原则： 试样中不存在的纯物质，否则会使色谱峰重叠而无法准确测定试样的色谱峰面积； 内标物的物理及物理化学性质应与被测物相近，当操作条件发生变化时，内标物与被测物均受到相应的影响两者相对校正因子基本不变； 色谱峰位于被测物色谱峰的附近，且能与被测物色谱峰完全分离； 内标物的浓度应与被测物的浓度相近。 例4.2.9 取二甲苯生产母液1500mg，母液中合有乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯及溶剂和少量苯甲酸，其中苯甲酸不能出峰。以150mg壬烷作内标物，测得有关数据如下： 物质 壬烷 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯 Ai/cm2 98 70 95 120 80 f`m 1.02 0.97 1.00 0.96 0.98 求各组分的含量。 解：母液中苯甲酸不能出峰，所以只能用内标法计算。由各组分的绝对校正因子计算得壬烷、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的相对校正因子分别为1.00，0.95，0.98，0.94，0.96。 根据内标法计算公式，对于乙苯有： 同样可以计算出对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯的质量分数分别为9.5%，11.5%，7.84%。 内标法的优点：不要求各组分全部出峰，无归一化法的限制，即只要被测组分能出峰，不和其他峰重叠，不管其他组分是否出峰或是否重叠，都可以用内标法进行定量分析，而且定量准确，受操作条件影响较小。 缺点：选用合适的内标物较为困难，每次都要淮确称量样品和内标物的量，不宜作快速分析。 ★内标标准曲线法 从内标公式可知： 如果每次称取同样量 m 的试样，每次加入相等量 ms 的内标物，则上式中m，ms均为常数，计算公式可写为： 三、高效液相色谱分析 High Performence Liquid Chro-matography, HPLC 气相色谱法适用于分析相对分子质量较小、沸点较低、热稳定性好的物质，这些物质约占有机化合物总数的25%～30%。 对于稳定性差、相对分子质量大 400以上 、沸点高的物质，宜用高效液相色谱法进行分析。 高效液相色谱法是用液体作为流动相的色谱法。 现代高效液相色谱法具有下列特点： 1 高压：液相色谱法使用液体作为流动相 简称载液 ，液体流过色谱柱时，所遇到的阻力很大，为了使载液迅速通过色谱柱，必须对载液