高压氧对正常和SIRS大鼠脾T淋巴细胞的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 高压氧对正常及SIRS大鼠脾T淋巴细胞的影响 前言 ， 高压氧作为一种治疗手段，广泛应用于临床。研究显示高压氧促进伤口部位 的纤维母细胞、上皮细胞和血管的增生，促进伤口愈合，增强细胞的杀菌能力， 对特殊厌氧菌具有致命的杀伤力。在全身炎症反应综合征(Systemicinflammatory response 以及抗炎作用的研究尚不多见。SIRS从一个新的角度阐明多器官功能障碍综合征 (multipleorgandysfunctionsyndrome，MODS)的重要病理生理及发生发展过程。 经过20余年的大量实验研究和临床资料揭示，创伤、感染、休克发展到MODS 存在着一条共同通路，即SIRS。本实验以SIRS为基础，以免疫功能和炎症反应 中具有代表性的脾T淋巴细胞为研究对象，研究高压氧对正常机体以及SIRS时 细胞免疫功能的影响，并探讨其作用机制。 方法 一、实验动物与分组 健康雄性SD大鼠50只，购自中国医科大学实验动物中心，体重约1401809， 随机分为5组，每组10只。A组：腹腔注射等量生理盐水(5ml／kg)；B组：腹腔 注射等量生理盐水(5ml／kg)，做3次高压氧；C组：腹腔注射酵母多糖一石蜡悬液 E组：腹腔注射酵母多糖一石蜡悬液(500mg／kg)，做3次高压氧。 二、大鼠SIRS模型建立 将酵母多糖粉剂和无菌液体石蜡混合，高频振荡15分钟，100C水浴80分 钟灭菌，制成浓度为100 mg／ml的酵母多糖A-石蜡混悬液，存放于4℃备用，临 用前40C水浴复温，高频振荡15分钟后注药。大鼠实验前18小时开始禁食， 不禁水。C、D、E组以500mg／kg体重给大鼠腹腔注射酵母多糖．石蜡悬液，A、B 组注射等量生理盐水(SmVkg)。 三、高压氧治疗方案 做1次高压氧的时间为腹腔注射后4小时，做3次高压氧的时间分别为腹腔 注射后4小时，10小时，18小时。每次高压氧都遵循以下方案：100％纯氧洗舱5 分钟，以清除舱内原有空气。匀速加压至2ATA(约10．15分钟)，用已校对的测氧 仪测舱内氧浓度达95％以上，期间以4L／min的速度持续通02避免C02蓄积，并 将压力维持在2ATA。l小时后以同样速度匀速减至常压，出舱。 四、标本采集及检测 腹腔注射24小时后，每只鼠按实验设定顺序取脾，标号，脾脏剪至糊状，100 10分钟，弃上清，低渗休克法溶解红细胞， 目筛滤过(加PBS)，离心1000rpm 弃上清。(3)加入冷PBS 4C离心10分钟，弃上清，重 lml，轻轻震荡，1000rpm uL uL lOuL， 复2次。(4)加200Buffo。(5)加10AnnexinV-FITC。(6)加PI 25℃，15分钟。(7)，加300uLBuffer30分钟内上流式细胞仪测量。 五、统计学方法 13．0for 用SPSS Windows软件分析数据。各组数值用均数4-标准差表示，用 F检验做方差齐性检验，当方差齐性相等时，两组间采用两独立样本t检验，方差 齐性不等时采用近似t检验即t’检验。设P0．05为有显著性差异。： 结 果 一、大鼠SIRS模型建立效果 一般情况：腹腔注射酵母多糖．石蜡溶液组大鼠呼吸急促，伴有明显喘鸣，皮 肤粘膜发绀，出汗，毛色灰暗，部分大鼠有鼻出血，腹胀，腹泻。大鼠进食明显 减少，活动差，对外界刺激无反抗。大体改变：杀鼠后，见SIRS组大鼠腹腔渗出 增多，肠管扩张，程度不一；肝脏呈暗红色或暗紫色；肺脏可见不同程度肿胀， 部分可见充血出血点；心脏，肾脏，脾脏，胰腺无明显大体改变。 二、高压氧对正常大鼠脾T细胞的影响 2 基本无变化，CD3十CD4+／CD3+CD8+比值明显下降(尸O．05)。 三、酵母多糖对脾T细胞的影响 少程度基本平行，‘所以CD3+CIM+／CD3+CD8+无变化。 四、