蛇床子素对CYP3A、CYP2C9与CYP2D6酶活性影响的研究.pdfVIP

摘要 要 背景： 前期利用肝微粒体实验，研究证实了在人肝微粒体中CYP3A4 是蛇床子素 的主要代谢酶，且CYP2D6、CYP2C9 也可能参与了其代谢。本课题通过人肝微 粒体及大鼠体内代谢模型，探讨蛇床子素对参与其代谢的三种亚酶活性的影响。 目的： 本课题拟通过人肝微粒体体外代谢研究方法并结合大鼠体内实验，研究蛇 床子素对参与其代谢的三种主要亚酶探针药咪达唑仑（MDZ）、右美沙芬（DM）、 双氯芬酸 （DIC）代谢的影响，以考察蛇床子素对这三种亚酶活性的影响，进一 步充实蛇床子素的药理研究，为蛇床子素及含蛇床子中药的临床合理应用提供 理论依据，同时也为开展简单香豆素类化合物对药物代谢酶作用的影响研究提 供资料。 方法： 1.建立检测大鼠血浆和人肝微粒体中MDZ 及人肝微粒体中DM 和DIC 的 HPLC-UV 方法。 2.通过对温孵时间、蛋白浓度、底物浓度三方面的考察建立 DM、DIC 和 MDZ 在人肝微粒体体外最佳反应条件。 3.研究在体外肝微粒中，蛇床子素对人肝微粒体CYP3A4、CYP2C9、CYP2D6 亚酶活性的影响。 4.研究腹腔注射不同剂量蛇床子素，尾静脉注射相同剂量的MDZ 后，蛇床 子素对CYP3A介导的MDZ 在大鼠体内药代动力学的影响。 结果： 1.建立了检测大鼠血浆和人肝微粒体中MDZ及人肝微粒体中DM和DIC 的 HPLC 方法。 2.DM 在人肝微粒体中37℃，120r/min 的情况下进行孵育，在5-40min 内， DM 呈线性消除；40-80min 消除速率减缓，80-160min 几乎不再变化，故最佳孵 育时间为80min；在0.1-0.5mg/ml 范围内，DM 的消除随蛋白浓度增加而加快， 确定蛋白浓度为0.5mg/ml；在10-100μM 浓度范围内，DM 代谢速率随底物浓度 增加变化最大，因此，确定的最佳反应条件为80min、0.5mg/ml、100μM。DIC II 万方数据 摘要 37 120r/min 6-96min DIC 在人肝微粒体中 ℃， 的情况下进行孵育，在 内， 呈线 性消除；故最佳孵育时间为96min；在0.1-0.4mg/ml 范围内，DIC 的消除随蛋白 浓度增加而加快，确定蛋白浓度为0.4mg/ml；在 10-80μM 浓度范围内，DIC 代 谢速率随底物浓度增加变化最大，因此，确定的最佳反应条件为 96min、 0.4mg/ml、80μM。MDZ 在人肝微粒体中37℃，120r/min 的情况下进行孵育，在 5-30min 内，MDZ 呈线性消除，故最佳孵育时间为30min；在0.01-0.3mg/ml 范 MDZ 0.2mg/ml 2.5-5μM 围内， 的消除随蛋白浓度增加而加快，确定蛋白浓度为 ；在 浓度范围内，MDZ 代谢速率随底物浓度增加变化最大，因此，确定的最佳反应 条件的为30min、0.2mg/ml、5μM。