微生物营养论述.ppt

第3节 微生物的营养 关键问题： 微生物生命活动需要哪些营养物质？怎样培养微生物？ 1、碳源 2、氮源 3、生长因子 4、无机盐 5、水 (1)生长因子：一些微生物不需要从营养物质中摄取生长因子，而是依靠自身体内合成。另外，一些微生物自身体内缺乏合成生长因子所需的酶，因此只能从营养物质中直接获得，否则就不能生存。 (2)同一物质可作一种或几种营养成分：NaHCO3既作为无机盐又作碳源，NH4 +或NO— 3既作氮源又作无机盐，含C、H、O、N的物质如蛋白胨、酵母膏既可作碳源、氮源，又可作生长因子 。 (3)硝化细菌的碳源、氮源、能源分别为CO2、NH3、NH3，所以无机N可以提供能量。 硝化细菌和大肠杆菌的碳源、氮源和能源分别是什么？ 二、培养基 1、定义：人工配制的、适合微生物生长、繁殖或产生代谢产物的营养基质。 琼脂为什么是理想凝固剂？ ②按照化学成分分 天然培养基 合成培养基 ③按照培养基的用途 通用培养基 选择培养基 选择培养基中选择微生物的方法： (1)利用微生物对某种物质的抗性分离 如培养基中加入青霉素可抑制细菌、放线菌等，从而可分离得到酵母菌和真菌等。 (2)利用微生物特殊的代谢途径分离 如培养基中不加氮源，可分离出自生固氮微生物； 若培养基中不加有机物，则可分离自养型微生物。 (3)常见微生物的分离实例： ①真菌、霉菌： ②金黄色葡萄球菌： ③固氮微生物： ④自养型微生物： ⑤光合细菌： 3、配制培养基的基本原则 （1）选择适宜的营养物质 培养的微生物种类、培养的目的， 如光合微生物：无机盐+水 异养微生物：牛肉膏蛋白胨培养基 大肠杆菌：碳源、无机盐和水 酵母菌：豆芽汁蔗糖培养基 实验1.2培养基的配制 实验方法与步骤 1、计算：根据培养基配方计算实际用量； 2、称量：称取各种原料成分（注意牛肉膏称取方法） 3、熔化：加自来水定容至200ml，溶 解，加热至沸腾 后加琼脂2g，加热搅拌至熔化； 4、定容：加水至200ml（？） 5、调pH:滴加盐酸或氢氧化钠调节至7.2-7.4 6、灭菌：将培养液注入烧瓶，包扎置于高压灭菌锅中 1.05kg/cm2、121℃灭菌15-30min。 7、倒平板：灭菌后待培养基冷却至50 ℃左右，用酒精 灯火焰烧瓶口后，将培养液无菌操作倒入 已灭菌的培养皿。 问题 1、培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，用来倒平板。你用什么方法来估计培养基的温度？ 2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 3、平板培养基冷凝后，为什么要将培养皿倒置？ 实验1.3微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察 1、接种和菌落观察 划线法 涂布法 点接法 抗生素对微生物的抑制作用 课题 1、同一种抗生素的不同浓度对同种微生物的抑制 2、同种抗生素对不同微生物的抑制 3、不同抗生素对同种微生物的抑制 。。。。。。 圆纸片在放时的注意点 1、抗生素和无菌水滤纸圆片放置时要沥干 2、圆纸片间勿相互沾染 选择性培养的结果 斜面接种： 无菌操作 泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无论倒平板、划线法，还是涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 ⑴培养细菌用的培养基与培养皿 ⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管 ⑶实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 倒平板技术 1 2 3 4 用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉 温度降到刚刚不烫手时，可以倒平板了。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时， 以检查灭菌是否彻底。 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3.在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 涂布法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移液器 涂布法： b.涂布平板： 不超过0.1ml 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 清晰区（抑菌圈) 2、抗生素对微生物的抑制作用 ——涂布法 鉴别性培养的结果 * * 什么叫“营养物质”？